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目的:探讨蛹虫草蛋白提取物（Cordyceps militaris Protein Extract,CMPE）的抗衰老作用及其相关机制。方法:采用硫酸铵沉淀法制备CMPE;利用DPPH、超氧阴离子自由基、羟基自由基清除活性评价CMPE的体外抗氧化能力;建立D-半乳糖（D-Galactose,D-Gal,800mM）诱导小鼠胚胎成纤维细胞（NIH/3T3）衰老模型,MTT法检测CMPE对NIH/3T3细胞的增殖能力;通过β-半乳糖苷酶染色法对衰老细胞进行染色,通过分光光度法分析测定NIH/3T3细胞内超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）水平、过氧化氢酶（Catalase,CAT）活性及活性氧（reactive oxygen species,ROS）活性;采用RT-PCR法检测NIH/3T3细胞中Nrf2、GCLM、NQO1、GCLC、P53、P16、P21、CDK4、Cyclin D1 mRNA表达水平;利用D-Gal诱导小鼠衰老模型,将ICR小鼠按照随机分组法分成4组,CON组（双蒸水灌胃,生理盐水进行皮下注射）;MOD组（双蒸水灌胃,400 mg·kg-11 D-Gal皮下注射）;PC组(800 mg·kg-1吡拉西坦灌胃,400 mg·kg-11 D-Gal皮下注射);CMPE组（800 mg·kg-11 CMPE灌胃,400mg·kg-11 D-Gal皮下注射）,连续10 w后进行小鼠避暗、跳台和Morris水迷宫行为学实验;通过分光光度法分析小鼠脑组织中SOD、CAT、MDA、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）及8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2deoxygu-anosine,8-OHdG）水平,通过ELISA法检测衰老小鼠血清中炎症因子白介素-6（interleukin-6,IL-6）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）水平;HE染色法对小鼠脑组织海马区进行病理学观察,通过双免疫荧光标记法观察小鼠齿状回新增殖神经细胞情况;通过RT-PCR法检测小鼠脑组织中Nrf2、GCLM、NQO1、GCLC、P53、P16、P21、CDK4、Cyclin D1 mRNA表达水平。结果:CMPE对DPPH、超氧阴离子自由基和羟基自由基最大清除率分别达到76.16%、75.14%和66.80%;MOD组中NIH/3T3细胞存活率为67.1%（p<0.01）,CMPE（100μg/mL）预处理后细胞存活率为97.23%（p<0.01）;与MOD组相比,CMPE可以显著提高NIH/3T3细胞中SOD（p<0.05）、CAT（p<0.05）活性,并降低MDA（p<0.01）及ROS（p<0.05）水平;与MOD组相比,CMPE组GCLC、NQO1、GCLM的mRNA表达显著升高（p<0.05）,CMPE组P53、P21 mRNA表达水平显著减少（p<0.05）,CMPE组cyclin D1、CDK4 mRNA表达水平显著升高（p<0.05）;衰老模型小鼠行为学结果表明:跳台实验,跳台潜伏期明显延长（p<0.05）,错误次数显著减少（p<0.05）。避暗实验,避暗潜伏期明显延长（p<0.01）,错误次数显著减少（p<0.05）。Morris水迷宫实验,与MOD组相比,CMPE组小鼠定位航行潜伏期明显缩短（p<0.05）;与MOD组相比,CMPE可以显著提高脑组织SOD（p<0.05）、GSH-Px（p<0.01）及CAT（p<0.05）水平,降低脑组织的MDA（p<0.05）含量,与MOD组相比,CMPE能够减少脑组织8-OHdG（p<0.01）的生成及降低小鼠血清中炎症因子IL-6（p<0.01）和TNF-α（p<0.01）水平;与MOD组相比,CMPE组神经元的形态和数量得到显著改善;与MOD组相比,CMPE显著上调Brdu/NeuN双标阳性细胞数（p<0.01）,与MOD组相比,CMPE组脑组织Nrf2、NQO1、GCLC、GCLM mRNA表达水平显著升高（p<0.05）,CMPE组脑组织P53、P21 mRNA表达水平显著减少（p<0.05）;CMPE组脑组织cyclin D1、CDK4、mRNA表达水平显著升高（p<0.01）。结论:制备的CMPE具有明显的体外抗氧化活性;CMPE具有抗衰老作用,可能是通过下调P53/P21信号通路相关基因的表达并激活抗氧化相关信号通路Nrf2-ARE关键基因的表达来实现的。