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背景：RSV通过上调细胞因子信号传导抑制因子(suppresor of cytokine signailing, SOCS),拮抗酪氨酸蛋白激酶(Janus Kinase,JAK)/信号转导子和转录活化子(signal transducers and activators of transcription, STAT)抗病毒基因激活,从而抑制宿主天然抗病毒免疫调节作用。非结构蛋白(nonstructural proteins, NS)在拮抗宿主天然抗病毒免疫方面也发挥重要作用。但是RSV NS在如何诱导SOCS基因信号调节以及炎症细胞因子分泌中的分子机制尚不清楚。目的：通过探讨RSVNS在感染上皮细胞中刘SOCS基因表达调控的分子机制来证实RSVNS是参与病毒免疫逃逸的重要触发因子。方法：通过人工构建RSV重组表达质粒pNSl, pNS2和pNS1/2,并在人上皮细胞转染,建立瞬时和持续表达模型,Western blot检测质粒目的蛋白表达；Real-time PCR、 Western blot检测RSV NS在气道上皮细胞表达对SOCS1和SOCS3基因活性的影响；Real-time PCR检测TLR3和视磺酸诱导基因I (retinoic acid-inducible gene1, RIG-I) mRNA表达水平；siRNA抑制TLR3或RIG-I, Western blot检测SOCS1和SOCS3蛋白表达水平；Western blot检测NS蛋白对STAT1/2磷酸化影响；Real-time PCR检测IFN-a刺激相关基因2,5寡聚腺苷酸合成酶(2,5oligoadenylates synthesis,2,5-OAS),黏病毒抗性蛋白A(myxovirus resistance protein A, MxA) mRNA表达水平；Western blot检测RSV NS在气道上皮细胞对核因子κB(nuclear factor-KB, NF-κB)基因表达影响；ELISA检测培养上清趋化因子白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6),受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(regulated upon activation normal T cell expressed and secrected factor, Rantes)和巨噬细胞炎性蛋白-lα(macrophage inflammatory protein-la, Mip-la)的浓度。结果：(1)重组质粒pNS1-flag, pNS2-HA和pNS1/2-flag, pNSl/2-HA均在转染后2小时可见目的蛋白表达,相对蛋白分子量分别为36KD,36KD和36KD,36KD。(2) RSV NS1(l0ug/ml)可以上调A549细胞SOCS1和SOCS3基因表达(p<0.05),而RSV NS2(l0ug/ml)仅上调A549细胞SOCS1基因表达(p<0.05)。这种上调效应并非通过直接激活TLR3/RIG-I信号途径产生内源性干扰素而激活JAK/STAT来调控,RSVNS对SOCS1和SOCS3mRNA的上调效应在TLR3/RIG-I激活前就已产生,抑制TLR3/RIG-I不影响NS1, NS2对SOCS1, SOCS3上调。(3)NS1和NS2蛋白可分别抑制α干扰素(interferon-a, IFN-a)诱导的STAT2磷酸化,且NS1与NS2蛋白的协同效应可显著抑制STAT2磷酸化；NS1和NS2蛋白可显著抑制IFN-a刺激相关基因2,5-OAS和MxA表达。(4)NS1和NS2蛋白通过抑制核内NF-κB活化降低IL-6,Rantes和Mip-a分泌。结论：尽管IFN和RSVNS均可上调上皮细胞SOCS表达,但二者作用机制不同。前者通过TLR3/RIG-I介导的STAT1/2激活上调SOCS,而后者直接激活核转录上调SOCS基因表达。结果提示,RSV复制通过NS蛋白抑制内源性干扰素的信号激活,发挥拮抗宿主抗病毒免疫效应其分子机制。背景：呼吸道合胞病毒(RSV)持续感染的上皮细胞克隆后连续传代后,子代细胞表现为非均一性,分别向两个方向转化：部分细胞持续表达病毒抗原,细胞增殖速度减慢并出现周期性细胞病变；而另一部分细胞失去病毒抗原。持续表达病毒抗原细胞自身能够抵御野生病毒毒力而幸存并诱导细胞表达高水平的趋化因子和细胞因子,如IFN-p, Mip-a, IL-8和Rantes。但是病毒是如何抑制宿主过强的天然抗病毒反应从而使病毒保持低水平的复制的分子机制尚不清楚。目的：通过探讨RSV持续感染触发的天然抗病毒免疫反应以及相关负调节分子,以期证实RIG-I和TLR3途径激活的抗病毒效应与SOCS蛋白负调节因素的平衡是RSV持续感染的重要因素,进而阐明RSV潜伏感染的机制。方法：建立RSV持续感染细胞模型,测定培养上清病毒滴度,Real-time PCR检测细胞内病毒基因组核酸,Western blot检测TLR3, RIG-I, SOCS1/3, STAT1/2, pSTAT1/2蛋白表达量,Elisa检测上清中IFN-p, Mip-a, IL-8和Rantes水平。设计合成TLR3和SOCS1siRNA,按上述方法检测相应蛋白表达量和细胞因子水平。结果：RSV持续感染可以上调TLR3, RIG-I和SOCSl基因表达(p<0.05)。基因沉默TLR3和RIG-I mRNA, SOCS1表达上调；基因沉默TLR3mRNA, SOCS1和炎性细胞因子表达上调(p<0.05)；基因沉默SOCS1mRNA,炎性细胞因子表达无影响(p>0.05),pSTATl/2蛋白表达水平增高(p<0.05)。结论：RSV持续感染通过激活TLR3信号转导通路上调SOCS1基因表达,进而调控STAT1/2磷酸化水平,发挥拮抗宿主抗病毒效应使病毒得以复制形成持续感染。