论文部分内容阅读
瘤背石磺(Onchidium struma),俗称海癞子、土鸡、土海参等,属于软体动物门(Mollusca)、腹足纲(Gastropoda)、肺螺亚纲(Pulmonata)、缩眼目(Systellommatophora)、石磺科(Onchidiidae),瘤背石磺的肌肉组织中含有丰富的蛋白质和多肽,是一种极具开发潜力的海洋贝类生物,为了进一步研究瘤背石磺肌肉蛋白和多肽的特性,本文主要研究内容和结果如下:(1)以瘤背石磺为原材料,分别选择胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶5种蛋白酶进行单酶水解,选择酶解效果最好的两种酶(碱性蛋白酶和胰蛋白酶)对样品进行复合酶解,通过单因素和响应面法确定了酶解的最佳条件为:温度51℃,pH 10,时间2.2 h,酶比例1:1,在最优酶解工艺下测定水解度达到20.13%,温度、pH、时间和酶比例四个单因素对瘤背石磺肌肉蛋白水解度的影响极显著;温度和pH的交互作用影响显著。(2)根据最优酶解工艺条件制备瘤背石磺肌肉蛋白酶解液,采用不同截留分子量(1kD、3kD)的超滤离心管分离酶解液,以DPPH清除率为指标,选择活性较高的组分继续纯化,在SP Sephadex C-25离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析分离后,以DPPH清除率和羟基自由基清除率为指标,得到抗氧化活性最高的肽段组分,利用Sephadex G-75测定所得组分的分子量范围。结果表明:超滤后从酶解液中得到了三个组分(OSM1、OSM2和OSM3),其中OSM3的抗氧化能力较好,选用SP Sephadex C-25阳离子交换柱对OSM3(<1kD)进行分离,共得到3个组分,其中OSM3-2组分的DPPH自由基和羟基自由基清除能力最强;选用Sephadex G-75凝胶柱继续对OSM3-2进行分离,通过蒸馏水和PBS两种不同的的洗脱液洗脱得到2个组分,其中OSMP1组分的DPPH自由基和羟基自由基清除能力较强,清除率分别为72.25%和73.8%,同时测得OSMP1的分子量分布为558-1032。(3)对瘤背石磺粗蛋白和多肽的功能特性进行研究,比较了瘤背石磺肌肉粗蛋白和多肽的吸水力和吸油力,同时研究了不同pH条件下了瘤背石磺肌肉粗蛋白和多肽的乳化性和乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性,并以抗坏血酸(VC)为参比,研究了瘤背石磺肌肉粗蛋白和多肽的总还原力。结果表明:瘤背石磺粗蛋白的吸水力明显高于瘤背石磺多肽,温度对瘤背石磺粗蛋白的吸水力影响不大,而对瘤背石磺多肽吸水力影响明显,随着温度的上升吸水力下降,瘤背石磺粗蛋白的吸油力高于瘤背石磺多肽,而且随着温度的变化,瘤背石磺粗蛋白的吸油力维持不变,瘤背石磺多肽吸油力下降;瘤背石磺粗蛋白和瘤背石磺多肽的乳化性和起泡性随着pH的变化而变化,在等电点处两者均达到最低值;瘤背石磺粗蛋白和瘤背石磺多肽均有一定的总还原力,但低于抗坏血酸(VC),在浓度相同时,瘤背石磺多肽的总还原力大于瘤背石磺粗蛋白的总还原力。