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本实验主要研究以鸡肉粉（poultry by-product meal,PBM）、黑水虻幼虫粉（black solider fly larvae meal,HM）和乙醇梭菌蛋白（Clostridium autoethanogenum protein,CAP）分别替代鱼粉对暗纹东方鲀（Takifugu obscurus）生长性能、蛋白代谢及相关基因表达的影响,以确定上述三种蛋白源在暗纹东方鲀饲料中替代鱼粉的合适比例,为暗纹东方鲀配合饲料的精准设计提供依据,缓解鱼粉资源紧张的问题。1.鸡肉粉替代鱼粉对暗纹东方鲀生长性能、蛋白代谢及相关基因表达的影响本实验以初始体重为（16.78±0.36g）的暗纹东方鲀幼鱼为实验对象,以鸡肉粉（PBM）分别替代饲料中0、15%、30%、45%和60%的鱼粉配制成5种等氮等脂的实验饲料,分别记为PBM0、PBM15、PBM30、PBM45和PBM60。每组饲料设置3个平行缸,每缸30尾鱼,每天表观饱食投喂三次,实验周期为56d。实验结果表明,鸡肉粉替代45%的鱼粉后并未对暗纹东方鲀幼鱼的饲料利用、肌肉氨基酸组成、肌肉质地、血清生化指标以及干物质消化率指标产生显著影响（P＞0.05）,但是对生长具有显著抑制作用（P＜0.05）;当鸡肉粉替代60%的鱼粉后,鱼的生长受到抑制（P＜0.05）,但饲料效率未受到显著影响（P＞0.05）。陆源油脂替代鱼油会造成n-3系列多不饱和脂肪酸的显著减少,此理论早已被认证。因此鸡肉粉中的油脂替代部分鱼油后,暗纹东方鲀肌肉和肝脏中的n-3多不饱和脂肪酸含量显著降低（P＜0.05）。鸡肉粉中含有较高含量的饱和脂肪酸、C18:1n-9和C18:2n-6,能够满足鱼类对能量供应和18碳不饱和脂肪酸的需求;鸡肉粉的添加提高了鱼体中C18:1n-9、C18:2n-6和n-6系列多不饱和脂肪酸的含量。鸡肉粉替代鱼粉比例的提高显著下调暗纹东方鲀肝脏中4EBP-1的表达（P＜0.05）,但对TOR、S6K1和4EBP-2的表达没有显著影响（P＞0.05）。综上所述,鸡肉粉在暗纹东方鲀幼鱼饲料中最适鱼粉替代水平为30%,占饲料干物质基础的14.4%。2.黑水虻幼虫粉替代鱼粉对暗纹东方鲀生长性能、蛋白代谢及相关基因表达的影响本实验以初始体重为（16.33±0.34g）的暗纹东方鲀幼鱼为实验对象,以黑水虻幼虫粉（HM）分别替代饲料中0、8%、16%和24%的鱼粉配制成四种等氮等脂的实验饲料,分别记为HMO、HM8、HM16和HM24。每组饲料设置3个重复缸,每缸30尾鱼,每天表观饱食投喂3次,实验周期为56d。实验结果表明,黑水虻幼虫粉替代鱼粉并未对暗纹东方鲀的生长性能、肌肉质构和血清生化指标产生显著影响（P＞0.05）。与对照组相比,16%替代组增重率提高19%,显示出黑水虻虫粉低比例替代鱼粉具有潜在的提高生长性能的作用。与低比例（8%）替代组相比,高比例（24%）替代组显著降低了饲料效率（P＜0.05）。黑水虻幼虫粉中含有较高含量的月桂酸（C12:0）和C18:2n-6,能够满足鱼类对能量供应和18碳不饱和脂肪酸的需求;黑水虻幼虫粉的添加显著提高了鱼体C14:0和n-6脂肪酸的含量（P＜0.05）。黑水虻幼虫粉替代鱼粉显著上调暗纹东方鲀肝脏中TOR的表达而下调4EBP-2的表达（P＜0.05）,但是对S6K1和4EBP-2的表达没有显著影响（P＞0.05）。黑水虻幼虫粉替代饲料中24%以下的鱼粉并未显著影响暗纹东方鲀的生长性能、鱼体化学组成、肌肉质地和血清生化指标;低比例（8-16%）替代还具有潜在的提高生长性能和饲料利用的作用。因此,在基础饲料鱼粉为42%的条件下,黑水虻幼虫粉能够替代暗纹东方鲀饲料中24%的鱼粉,占饲料干物质基础的20.4%。3.乙醇梭菌蛋白替代鱼粉对暗纹东方鲀生长性能、蛋白代谢及相关基因表达的影响本实验以初始体重为（18.40±0.02g）的暗纹东方鲀幼鱼为实验对象,以乙醇梭菌蛋白（CAP）分别替代饲料中0、20%、40%和80%的鱼粉配置成4种等氮等脂的实验饲料,分别记为CAP0、CAP20、CAP40和CAP80。经过63d的养殖实验,结果表明,当乙醇梭菌蛋白替代饲料中20%的鱼粉时,并未显著影响暗纹东方鲀的增重率和饲料效率（P＞0.05）;高替代组（CAP40和CAP80）显著抑制暗纹东方鲀生长性能和饲料利用（P＜0.05）。乙醇梭菌蛋白的加入并未对暗纹东方鲀的鱼体化学成分和形体指标产生显著影响（P＞0.05）。当乙醇梭菌蛋白替代40%以上的鱼粉时,会显著降低脂肪消化率（P＜0.05）;鱼粉替代量达到80%时,干物质消化率、蛋白质消化率和脂肪消化率较对照组显著下降（P＜0.05）。CAP替代鱼粉比例的提高能够显著上调肌肉和肝脏中TOR的表达（P＜0.05）,但对S6K1、4EBP-1和4EBP-2的表达无显著影响（P＞0.05）;CAP的加入能够显著上调肠道中小肽转运载体PepT1的表达（P＜0.05）。综合上述结果得到在基础饲料鱼粉为42%的条件下,乙醇梭菌蛋白替代鱼粉的最适水平为20%,占饲料干物质基础的8.4%。在本实验中,暗纹东方鲀饲料中鸡肉粉、黑水虻幼虫粉和乙醇梭菌蛋白最适替代鱼粉水平分别为30%、24%和20%。