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目的:本课题采用肝脏冷缺血再灌注肝动脉结扎大鼠模型:1、观察肝脏组织血流及病理变化。2、探讨肝脏缺氧时HIF-1α mRNA、HIF-1α蛋白表达规律及在肝脏低氧损伤中的作用。3、探讨p53蛋白表达与肝细胞凋亡在肝低氧损伤中的作用。4、阐述iNOS mRNA表达、iNOS、NO在低氧肝损伤中的意义。5、探讨HBO对肝动脉性肝脏低氧的保护作用。6、观察HBO对肝移植HAT病人的治疗效果。本课题通过以上研究,旨在深入探讨肝脏动脉缺血低氧损伤机制及HBO治疗的机制,初步尝试HBO治疗HAT,为临床应用HBO治疗肝脏缺氧性损伤及肝移植后HAT提供理论依据。 方法:雄性SD大鼠96只,随机分为3组:对照组,肝动脉结扎组(HAL)及高压氧治疗组(HBO)。各组均行剖腹术,肝脏骨骼化及肝素林格氏液肝脏灌注,后2组行肝动脉结扎术。高压氧组于术后2小时行高压氧治疗,每次吸纯氧60分钟,2次/日。治疗压力为0.25Mpa(2.5个绝对大气压)。术后1天、3天、7天、14天留取肝脏及血标本。采用激光多谱勒测定术前及术后肝组织血流变化:RT-PCR方法检测肝脏组织HIF-1α mRNA、iNOS mRNA表达水平;TUNEL法检测肝细胞凋亡;免疫组织化学方法检测肝组织HIF-1α及p53蛋白表达水平;检测肝组织iNOS、NO水平及血清iNOS、NO、ALT水平。另外,对临床4例肝移植术后HAT患者行HBO治疗并进行随访,观察HBO治疗前后血清肝功能变化及影像学变化。 结果:1、冷缺血再灌注HAL组及HBO组大鼠复流后,肝组织血流下降约22%,与对照组相比,差异显著。术后14天,HBO组肝血流接近对照组水平,较HAL组肝血流有明显增高(4.22±0.31V vs 3.62±0.49V)。2、HAL组肝脏HIF-1α mRNA水平及HIF-1α蛋白较对照组明显增高,免疫组化显示