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冠状病毒是引起人和动物的呼吸道与肠道感染的一种重要病原,还有些冠状病毒能引起动物的肝炎和神经系统疾病。冠状病毒自发现后,随着对其危害认识的加深,研究也逐渐深入,尤其在2002年末冠状病毒的新成员——SARS病毒出现以后,对于冠状病毒的研究更加备受人们的关注。 猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible Gastroenteritis of Swine, TGE）是猪冠状病毒的主要代表,由它引起的猪传染性胃肠炎是猪的一种高度接触性传染病,不同年龄和品种的猪都易感,尤其以仔猪最易感,目前该病已遍布全世界各养猪国家,给养猪业造成了严重损失。1984年Pensaert等在比利时首次分离出一种与TGEV相近的、具有呼吸道嗜性的病原,称为猪呼吸道冠状病毒（Porcine Respiratory Coronavirus, PRCV）。它常和其他的呼吸道疾病发生混合感染而引起猪呼吸系统综合征,可常年不断发病,使猪只成批死亡。目前,该病在世界各地尤其是欧洲国家已广泛存在。 TGEV是单股正链RNA病毒,主要编码纤突糖蛋白（S蛋白）、膜结合蛋白（M蛋白）、核衣壳蛋白（N蛋白）、小膜蛋白（sM蛋白）4种结构蛋白。其中S蛋白对TGEV是非常重要的,是唯一能诱导机体产生中和抗体和提供免疫保护作用的结构蛋白。 目前,普遍认为PRCV为TGEV的基因缺失变异株,两者在结构上非常相似,基因组同源性达到96%以上。两者的区别主要在于,PRCV的S基因不存在B、C两个抗原位点,同时PRCV的ORF3/3a和ORF3-1/3b有不同程度的缺失。而且,由于PRCV和TGEV的抗原关系密切,二者能诱导出具有完全交叉反应的中和抗体,常规的血清学检测方法存在交叉反应,临床上不能将它们区分开。因此建立上述两种病毒感染的血清学鉴别诊断方法,用于检测临床上TGEV的感染,对于猪场TGE的综合防制是非常重要的。同时对于那些TGEV阴性而PRCV普遍存在的国家若想向TGEV阴性的国家出口种猪,鉴别诊断则成了决定贸易能否成功的关键因素之一。 在本研究中,我们根据Genbank上已登录的TGEV S基因序列,设计了两对引物P1、P2和P3、P4。首先将TGEV Purdue标准毒株接种已长成单层的PK-15细胞进行病毒的增殖。然后提取TGEV的基因组RNA,进行RT-PCR,分别扩增出目的片段S1和S1-2,其中S1片段含TGEV S基因近5`端的680bp片段,为PRCV缺失部分;S1-2片段含TGEV S基因近5`端的的2199bp,包含片段S1和TGEV与PRCV共有部分,它包含了TGEV S基因的全部四个抗原位点。将这两个片段克隆到pGEM-T载体上后进行了序列测定,进而构建了原核表达载体pGEX-S1、pGEX-S1-2,经诱导这两个片段在大肠杆菌BL21中得到了高效表达。表达产物大小分别为52KD和108KD,Western-blot检测表明,表达的蛋白具有