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目的:探究微小RNA-29a（microRNA-29a;miR-29a）对人角膜基质细胞肌成纤维细胞转化、增殖和迁移能力的影响。方法:本实验以人角膜基质细胞为实验对象,采用处于生长对数期的6代以内人角膜基质细胞,诱导其发生肌成纤维转化的条件选择转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）体外培养,根据实验设计分为以下几组:对照组（control,Ctrl）,TGF-β1组,过表达miR-29a对照+TGF-β1组（agoNC+TGF-β1）,过表达miR-29a+TGF-β1组（ago29+TGF-β1）,抑制表达miR-29a对照+TGF-β1组（ant NC+TGF-β1）,抑制表达miR-29a+TGF-β1组（ago29+TGF-β1）;检测细胞增殖和迁移能力的部分,根据实验设计则分可以分为:对照组（control,Ctrl）,小牛血清组（fetal bovine serum,FBS）,过表达miR-29a对照+FBS组（agoNC+FBS）,过表达miR-29a+FBS组（ago29+FBS）,抑制表达miR-29a对照+FBS组（ant NC+FBS）,抑制表达miR-29a+FBS组（ago29+FBS）。选用细胞增殖与毒性检测试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）来检测各组细胞活性,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术来检测各组细胞内下列指标:平滑肌肌动蛋白α（αsmooth muscle actin,αSMA）、粘连蛋白（fibronectin,FN）、Ⅲ型胶原（collagenⅢ,Col3）的表达情况,同时,各组样品的转染效率即miR-29a的含量也采用该方法进行检测。在蛋白水平,本研究通过蛋白印迹法（western blot,WB）检测各组样本内αSMA、透明质酸合成酶-2（hyaluronan synthase-2,HAS2）以及基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP2）的表达情况。同时采用免疫荧光检测αSMA、富含半胱氨酸型酸性蛋白（secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC,也可称作骨连接蛋白,osteonecfin）和FN在人角膜基质细胞内的分布和表达情况。采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-Bromo-2-deoxy Uridine,Brdu）检测各组细胞的增殖能力。采用伤口愈合实验模拟细胞迁移检测各组细胞的迁移能力,并使用Cytation 5细胞成像多模式检测仪对细胞迁移进行图像采集。结果:人角膜基质细胞呈多角形,树突状,排列规则。选用5ng/ml TGF-β1进行细胞后续处理,作用时间48小时。CCK-8结果显示:实验用浓度的TGF-β1作用于人角膜基质细胞48小时可以使细胞内肌成纤维细胞转化敏感指标αSMA、FN、Col3显著升高（P<0.05）,且并不会降低细胞活力（P<0.01）,同时,5ng/ml TGF-β1处理细胞48小时后miR-29a显著下降（P<0.05）。实验过程对人角膜基质细胞的各项处理不会影响细胞活力（P>0.5）,实时荧光定量PCR结果显示:实验转染miR-29a效率良好（P<0.05）,且Ctrl组和TGF-β1组进行比较说明TGF-β1能诱导人角膜基质细胞内αSMA、FN、和Col3在m RNA水平的表达升高（P<0.05）,agoNC+TGF-β1组和ago29+TGF-β1组相比提示过表达miR-29a后,αSMA、FN、和Col3在m RNA水平的表达降低（P<0.05）,ant NC+TGF-β1组和ant29+TGF-β1组进行对比则显示抑制miR-29a在人角膜基质细胞内的表达能促进、FN、和Col3在m RNA水平的表达（P<0.05）。WB结果显示:Ctrl组和TGF-β1组进行比较说明TGF-β1能诱导人角膜基质细胞内αSMA、HAS2和MMP2在蛋白水平的表达显著升高（P<0.05）,agoNC+TGF-β1组和ago29+TGF-β1组相比提示过表达miR-29a后,αSMA、HAS2和MMP2在蛋白水平的表达降低（P<0.05）,ant NC+TGF-β1组和ant29+TGF-β1组进行对比则显示抑制miR-29a在人角膜基质细胞内的表达能促进αSMA、HAS2和MMP2在蛋白水平的表达（P<0.05）。免疫荧光结果显示:TGF-β1能使细胞内SMA及SPARC有显著的高表达,（P<0.05）,而过表达细胞内的miR-29a后,上述蛋白则表现出下降趋势,反之若抑制miR-29a在细胞内的表达,以上三种蛋白的表达则呈现出升高的趋势。Brdu和模拟伤口愈合实验结果暂时还不能说明特异性上调细胞内miR-29a的含量能抑制人角膜基质细胞的增殖和迁移能力,同样也暂时还不能说明抑制细胞内miR-29a的表达能促进细胞的增殖和迁移能力。结论:TGF-β1可在体外诱导人角膜基质细胞发生肌成纤维细胞转化。而特异性的过表达miR-29a可以抑制该过程,相反,抑制miR-29a在细胞内的表达则能促进这一过程。同时,本实验暂时还不能说明miR-29a的过表达能抑制人角膜基质细胞的增殖和迁移能力,以及抑制miR-29a的表达能促进人角膜基质细胞的增殖和迁移能力。