耳突麒麟菜寡糖的抗食物过敏研究

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食物过敏主要指人体对食物中的抗原物质产生的由免疫介导的不良反应,其临床表现常表现为消化道、皮肤、呼吸系统等疾病。为了有效缓解食物过敏患者的过敏症状,临床主要用抗组胺类药物治疗,但是药物治疗具有副作用大、不能根治的缺点。所以开发抗过敏天然活性物质代替药物缓解食物过敏反应显得尤为重要。本研究通过酶解、超滤、DEAE-cellulose 52离子柱层析及Detoxi-Gel内毒素去除柱层析的方法获得高纯度的耳突麒麟菜寡糖(ESO),其总糖含量为97.87%;红外光谱结果分析显示ESO含有硫酸根的特征吸收峰,含量为18.17%。高效液相色谱分析发现ESO的主要单糖组成为半乳糖,含量达到87.65%;薄层层析结合离子色谱分析显示ESO主要由四糖和六糖组成,且分子量大小分别为796 Da和2112 Da。本研究主要通过体外细胞模型和体内小鼠模型共同评价并探究ESO抗过敏活性及其机制。体外细胞模型结果显示ESO能够显著抑制RBL-2H3细胞脱颗粒、组胺、白介素-4(IL-4)和肿瘤坏死因子-α的释放;小鼠骨髓来源肥大细胞(BMMCs)模型结果表明ESO能够特异性的诱导过敏原激活BMMCs的凋亡,而对未激活的BMMCs没有显著影响。利用来源于拟穴青蟹中的原肌球蛋白(TM)为过敏原,建立TM小鼠食物过敏模型评价ESO的抗过敏活性。小鼠食物过敏模型结果显示ESO能够显著缓解食物过敏小鼠的腹泻,低温等过敏症状;ELISA实验结果显示ESO能够显著降低过敏小鼠血清IgE、IgG1、组胺、肥大细胞蛋白酶的分泌水平;小鼠脾脏和肠系膜来源淋巴细胞因子蛋白水平结果显示ESO能够显著降低Th2细胞因子IL-4、IL-13的分泌,促进Th1细胞因子IFN-γ和调节性T(Treg)细胞因子IL-10的分泌;基因水平测定结果显示ESO能够显著下调Th2细胞转录因子GATA-3与Th1细胞转录因子T-bet表达的比值,上调Treg转录因子Foxp3的表达;流式细胞术测定结果显示ESO能够显著促进脾脏和肠系膜来源Treg细胞的分化。研究表明,细胞实验结果显示ESO能够显著抑制RBL-2H3细胞功能的激活,并且特异性的诱导过敏原激活的BMMCs的凋亡。小鼠食物过敏模型表明ESO能够显著促进Treg的极化,抑制Th2细胞功能的激活,下调相关过敏介质的释放。结果显示,ESO具有明显的抗食物过敏活性,能够为开发新型抗食物过敏功能食品或药品提供技术支持。
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