蓝舌病是由蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起的一种非接触性传染疾病,通过库蠓属的媒介昆虫在家养或者野生的反刍类动物之间进行传播。受BTV感染的绵羊通常表现出发热、粘膜水肿、溃疡等临床症状。BTV病毒为二十面体对称的RNA病毒,有27种不同血清型。BTV由7种结构蛋白(VP1～VP7)和5种非结构蛋白(NS1,NS2,NS3/NS3a,NS4,NS5)组成。L3基因所编码的VP3蛋白,相对来说是高度保守的结构蛋白,含有群特异性抗原决定簇,是病毒颗粒的主要核心蛋白。本研究通过原核表达系统正确表达蓝舌病I型病毒VP3蛋白并完成纯化,以此来研究该蛋白刺激机体产生保护作用和特异性抗体的情况。构建了p ET-32a-VP3、p ET-28a-VP3、p ET-28a-Nus A-VP3这3个重组载体,转化E.coli BL21(DE3);将p ET-28a-VP3转化BL21(DE3)(Tf16);用L-阿拉伯糖及IPTG诱导表达,以选取最优表达方案。最终选用BL21(DE3)(p ET-28a-VP3-Tf16)为最优表达菌,20℃,0.3 mmol/L的IPTG及3.5 mg/m L的L-阿拉伯糖诱导表达12小时效果最佳。在此条件下,上清中VP3蛋白的表达量比未使用分子伴侣时高出1倍。通过镍亲和层析的方法纯化蛋白,纯化后的BTV VP3纯度为75%,浓度为0.32 mg/m L。将纯化后的VP3重组蛋白以30μg/只的剂量免疫2只Balb/c小鼠,在第三次免疫后用ELISA测定血清效价,结果显示:抗体效价可达1:1.28×10~5;Dot-ELISA结果表明,原核表达的VP3重组蛋白能与BTV-1鼠源阳性血清反应,IFA试验结果显示,VP3重组蛋白免疫后所产生的抗体能与真核系统表达的VP3蛋白反应。本研究表明原核表达的VP3重组蛋白具有一定的免疫学反应活性,这为进一步研究BTV结构及蛋白的功能奠定了基础,为蓝舌病血清学诊断方法的建立打下了基础。