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目的： 检查弥漫大B细胞淋巴瘤（Diffuse large B cell lymphoma,DLBCL）中CARMA1基因突变、A20基因突变及甲基化情况，探讨其对DLBCL临床过程、预后及肿瘤耐药的影响，以发现 DLBCL临床发展和预后估计的相关因素，为淋巴瘤治疗方案的制定提供理论参考；构建MALT1基因cDNA质粒载体，为后续研究MALT1基因对DLBCL的影响奠定实验基础。 方法： 收集贵阳医学院附属医院病理科2005年1月至2013年06月期间诊断的弥漫大B细胞淋巴瘤104例。聚合酶链反应（PCR）扩增CARMA1基因外显子5、6、7、8、9及A20基因外显子3、6、7，DNA直接测序检查DLBCL肿瘤组织中A20基因启动子区5CpG岛甲基化的情况。免疫组织化学染色检测肿瘤细胞的PgP和Ki-67蛋白的表达情况。收集研究病例的临床病理资料和随访，对上述结果进行统计学分析。利用化学方法合成 MALT1的cDNA并通过 PCR扩增，经 Xho I和HindIII双酶切后插入pcDNA3.1-myc His(-)，经转化及克隆筛选后，提取阳性克隆质粒DNA进行测序鉴定。 结果： 1、临床病理资料：104例DLBC患者中男59例，女45例，男女之比：1.31:1。发病年龄24-87岁，发病中位年龄56岁，发病高峰年龄50-80岁；发生于结内64例，结外40例；临床分期：Ⅰ期39例，Ⅱ期20例，Ⅲ期15例，Ⅳ期30例；根据肿瘤细胞的来源，104例DLBCL中ABC-DLBCL65例，GCB-DLBCL39例。 2、CARMA1基因突变检测:在104例DLBCL中，检测出8例CARMA1基因第8号外显子存在错义突变（143位由碱基A置换碱基G），即由丝氨酸（GGA，Ser）变为苯丙氨酸（GAA，Phe）。总突变率为7.6％（8/104）。外显子5、6、7、9为野生型序列，均未发现突变。其中ABC-DLBCL突变率为10.8%(7/65)，GCB-DLBCL突变率为2.5%（1/39）； IPI指数3-5的病例（15.4%，6/39）较IPI指数0-2（3.0%，2/65）的病例CARMA1突变率明显增多，P=0.025；有B症状（6/38，15.8%）与无B症状（2/66，3.0%）病例之间CARMA1基因突变有明显差异(P=0.021)；临床分期晚的病例CARMA1基因突变发生率较分期早的病例有增多的趋势。 3、A20基因突变检测：在104例DLBCL中，发现18例A20基因存在3号外显子错义突变。表现为：（1）第3号外显子73位碱基G置换碱基T，即由谷氨酸（TTC,Glu）→丙氨酸（TGC,Ala），（2）第3号外显子208位碱基C置换碱基T，即由异亮氨酸（AAT,Ile）→缬氨酸（AAC,Val），（3）第3号外显子131位碱基A置换碱基C，即由半胱氨酸（GCA,Cys）→苯丙氨酸（GAA，Phe）。总突变率为17.3%（18/104）,其中第3号外显子73位突变率在ABC-DLBCL18.5%(12/65)与 GCB-DLBCL2.5%（1/39）病例之间具有统计学差异(P=0.001)。外显子6、7为野生型序列，均未发现突变。A20基因突变在临床分期较早（I,II期）与较晚（III,IV期）病例之间有统计学差异（6/53:12/33），P=0.028; IPI指数0-2组与3-5组病例之间A20突变亦有差异（7/58:11/28）P=0.025。 4、A20的甲基化检测：104例DLBCL中27例检出A20基因5调控区甲基化，甲基化率为26%（27/104）。其中ABC-DLBCL组甲基化率35.4%（23/65），GCB-DLBCL甲基化率10.2%（4/39），两组间比较差异有统计学意义(P=0.003)。 5、CARMA1、A20基因异常之间的关系：DLBCL中CARMA1基因突变与A20基因突变、A20甲基化之间均无相关关系(r=0.303，r=0.142，P>0.05)，A20基因突变与A20甲基化之间有正相关关系(r=0.277，P<0.05)。 6、DLBCL中PgP和Ki67表达及其与CARMA1和A20基因异常的关系：104例DLBCL中68例PgP阳性表达，表达率65.38%。27例Ki-67阳性率<40%，77例Ki-67阳性率≥40%。Ki67低表达与高表达病例之间A20基因突变有统计学差异（1/27：17/77，P=0.030），A20甲基化（P=0.607）无统计学差异。PgP表达在A20基因突变与未突变病例之间（P=0.021）、A20甲基化与无甲基化（P=0.012）病例之间均有统计学差异；在 CARMA1基因突变病例与未突变病例之间 PgP及Ki-67表达均无统计学差异（P=0.171），（P=0.366）。 7、随访：104例DLBCL中62例获随访，获访率59.6%。随访分析发现：DLBCL复发率在ABC-DLBCL和GCB-DLBCL病例之间（P=0.020）、Ki67高表达与低表达病例之间（P=0.013）及有和无A20基因甲基化病例之间（P=0.017）有明显差异；CARMA1基因突变、A20基因突变、Ki67表达率、IPI指数及B症状都与DLBCL的预后不良相关，（P=0.051，P=0.013，P=0.021，P=0.012，P=0.025），而A20甲基化、原发部位、临床分期、性别、血LDH水平、年龄、PgP表达均与DLBCL的预后无关（P均大于0.05）；CARMA1基因突变与未突变病例、A20基因突变与未突变病例之间的生存状况有统计学差异（P=0.017，P=0.016），而A20甲基化与无甲基化病例之间、ABC-DLBCL与GCB-DLBCL病例之间生存曲线差异无显著性（P均大于0.05）。 8、MALT1cDNA载体构建及筛选：化学合成的MALT1cDNA经PCR扩增、酶切后见目的条带，连接转化后，质粒DNA测序显示目的片段插入正确。 结论： 1、DLBCL部分病例中少数病例存在CARMA1和A20基因的错义突变以及A20基因的甲基化。A20基因第3号外显子73位碱基突变与DLBCL的细胞来源有关，ABC-DLBCL病例中多见。A20基因突变与甲基化常同时存在。 2、CARMA1和A20基因突变及A20基因甲基化对DLBCL的临床病理特征有一定影响。A20基因突变病例有较高的肿瘤细胞增殖活性，A20突变和甲基化病例有较高的PgP表达。 3、A20基因甲基化的DLBCL病例复发率较高，有基因突变的病例生存状况较差。A20和CARMA1基因异常可能是DLBCL不良预后的相关预测因子。 4、本研究成功构建MALT1cDNA表达质粒载体，为进一步探讨MALT1基因与DLBCL的发生发展的关系奠定了实验基础。