论文部分内容阅读
背景:抗癫痫药物可以控制癫痫发作，但尚不能调整导致癫痫发作的脑结构异常或改变癫痫的自然病程。研究发现mTOR抑制剂雷帕霉素在急性癫痫持续状态(SE)动物模型中不仅可以减轻癫痫发作，还能抑制癫痫的发生，但SE与人类的脑损伤和首次癫痫发作不符，而且其机制并无太多阐明。 目的:利用戊四氮(PTZ)慢性点燃大鼠模型观察在点燃初期腹腔注射雷帕霉素(RAPA)能否抑制癫痫发生;在点燃成功后腹腔注射雷帕霉素能否减少癫痫发作。通过研究突触可塑性来探讨雷帕霉素影响癫痫发生发展的可能机制。 方法: 1.实验动物随机分为雷帕霉素早期干预组PTZ+RAPA(E)及其对照组PTZ+NS(E)、早期干预空白组NS(E)、雷帕霉素晚期干预组PTZ+RAPA(L)及其对照组PTZ+NS(L)和晚期干预空白组NS(L)，按时间点造模和灌注取材，并观察雷帕霉素对癫痫发作的影响。 2.利用Tim染色观察各个实验组海马CA3区和DG区苔藓纤维出芽情况; 3.Western blot方法检测代表突触可塑性的GAP-43和P38的表达; 4.应用RT-PCR技术分析miRNA-21、miRNA-132、miRNA-134和miRNA-146a在各实验组的表达变化。 结果: 1.各组实验大鼠的死亡率:PTZ+RAPA(E)组为22.9％，PTZ+NS(E)组为10.4％; PTZ+RAPA(L)组为22.2％，PTZ+NS(L)组为11.1％。 PTZ+RAPA(E)组与PTZ+NS(E)组各个相对应的时间点体重差均有统计学差异。 2.PTZ+NS(E)组海马CA3区及DG区苔藓纤维出芽评分高于PTZ+RAPA(E)组和NS(E)组; PTZ+RAPA(L)组和PTZ+NS(L)组之间苔藓纤维出芽无统计学差异。 3.PTZ+RAPA(E)组与PTZ+NS(E)组相对应时间点发作分值的两两比较无统计学意义;在2周和4周时间点PTZ+RAPA(L)组的发作分值显著低于PTZ+NS(L）组。 4.各个时间点PTZ+NS(E)组GAP-43的表达均高于PTZ+RAPA(E)组和NS(E)组;PTZ+RAPA(E)组的1周时间点GAP-43的表达显著低于NS(L)组;PTZ+RAPA(L)组各个时间点GAP-43的表达均低于PTZ+NS(L)组和NS(L)组。 5.各个时间点PTZ+NS(E)组P38的表达均高于PTZ+RAPA(E)组和NS(E)组;PTZ+RAPA(E)组的P38的表达显著低于NS(E)组;PTZ+RAPA(L)组1周时间点P38的表达低于PTZ+NS(L)组，但与NS(L)组比较却无明显差异。 6.miRNA-21、 miRNA-132、miRNA-134、miRNA-146a在干预组及对照组的表达均较空白对照组显著降低; miRNA-21在PTZ+RAPA(E)组的表达较PTZ+NS(E)组低; miRNA-132、miRNA-134、miRNA-146a在PTZ+RAPA(E)组的表达较PTZ+NS(E)组增高; miRNA-134在PTZ+RAPA(L)组的表达较PTZ+NS(L)组增高。 结论: 1.雷帕霉素有一定的神经毒性，能明显降低未成年SD大鼠的体重，增加SD大鼠的死亡率，甚至可能导致癫痫易感性增加。 2.在戊四氮点燃大鼠模型中，点燃初始腹腔注射雷帕霉素能减少海马苔藓纤维出芽，这可能与雷帕霉素抑制GAP-43和P38在海马的表达有关。 3.在点燃成功后，雷帕霉素并不能逆转已经存在的苔藓纤维出芽，但能减少成年SD大鼠的癫痫发作，可能与雷帕霉素调控miRNA的表达有关，miRNA-134在其中可能起了一定的作用。