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猪流行性腹泻病毒（PEDV）可引起哺乳仔猪的急性水样腹泻、呕吐和脱水等症状,在新生仔猪中发病率和致死率较高。2010年变异的猪流行性腹泻病毒袭击了我国大部分地区,造成了猪流行性腹泻（PED）疫情的大面积爆发和流行,对养猪产业造成巨大的经济损失。为了探究该病原的流行病学和病原学特点,我们从北京、上海、浙江、河南、山东等5个省市不同发病猪场采集了77份腹泻样品,以实验室已建立的RT-PCR方法进行PEDV鉴定,结果显示PEDV阳性率达74.0%。分别从不同地区发病猪场选取部分阳性样品进行S基因的克隆和测序,并将其与国内外具有代表性的参考株S基因进行序列比对和遗传变异分析。核苷酸序列比对结果显示,本研究获得的S基因与流行株同源性达97.1%99.4%,而与经典株的同源性则在93.9%94.3%之间。氨基酸序列比对结果表明:与经典株相比,其S蛋白存在氨基酸插入(59QGVN62和N140)和缺失(163NI164/163DI164)的特征性突变;与流行株相比,除了一些散在氨基酸突变外,还存在2处特征性氨基酸突变,分别是182位（Y→H）和345位（F→L）。S基因的进化树分析显示,本研究所获得的S基因与流行毒株的S基因遗传距离较近,处于同一分支。结果表明本研究获得的PEDV毒株属于S基因存在明显变异的PEDV流行毒株,且20162017年流行的PEDV在2010年流行株的基础上其S基因又存在一些新的氨基酸突变。为探究猪流行性腹泻病毒流行毒株S基因编码蛋白的抗原特性,本研究以PEDV流行毒株FJzz1/2011株的S蛋白为研究对象,根据S蛋白的切割位点设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得S1基因,将其克隆至转移载体pFastBacHT A中,获得了阳性重组质粒pFastBac HTA-S1,将阳性重组质粒转化于E.coli DH10Bac感受态细胞中,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得了阳性重组穿梭质粒rBacmid-S1,提取重组穿梭质粒并转染于Sf9细胞,结果显示,Sf9细胞在转染48h后即可观察到明显的细胞病变,转染后72h收获重组病毒rBac-S1-P1,将收获的病毒在Sf9细胞上连续传3代,取P3代重组病毒感染Sf9细胞,72h后收获细胞进行IFA鉴定、SDS-PAGE电泳和western blot分析,结果显示,P3代重组病毒rBac-S1-P3感染的细胞呈现亮绿色荧光,证实其可以被抗PEDV阳性猪血清和抗S1蛋白的单抗所特异性识别。SDS-PAGE电泳结果显示在大约120kDa左右可观察到一条特异性目标条带。该目标条带经western blot鉴定证实其可以被抗S1蛋白的特异性单抗所识别。为了获得针对S蛋白的单克隆抗体,我们用超离纯化的PED病毒粒子免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,鉴定出8株可特异性识别PEDV感染的Vero细胞的单克隆抗体,进一步利用能够表达S1蛋白的重组病毒rBac-S1感染的Sf9细胞进行IFA筛选,最终获得了5株能特异性识别S1蛋白的单抗杂交瘤细胞株,本研究结果为今后继续深入研究PEDV S蛋白的抗原性奠定了基础。