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目的：
本文以鼻咽癌CNE-2Z细胞株作为研究对象,采用不同终浓度的As2O3作用于CNE-2Z细胞,观察抑癌基因的表达及去甲基化情况,来进一步研究As2O3对鼻咽癌细胞中抑癌基因RASSF1A、p16去甲基化作用及表达的影响,以其从分子水平探讨As2O3对鼻咽癌的作用机制,为探讨鼻咽癌新的治疗方案提供理论依据。
方法：
用终浓度为2.0μmol/L、1.01μmol/L、0.50mol/L,的As2O3作用于鼻咽癌CNE-2Z细胞系的处理组和不加药物的空白对照组,通过作用48h后,采用反转录PCR(RT-PCR)检测鼻咽癌CNE-2Z细胞系中抑癌基因RASSF1A、p16处理前后mRNA水平的表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测As2O3处理前后RASSF1A、p16基因去甲基化的情况,采用免疫印迹(Western blot)方法检测As2O3处理前后抑癌基因RASSF1A、P16蛋白水平的表达情况。用Ouantity One软件测量目的条带灰度积值与内参条带灰度积值的比,进行半定量分析。
结果：
(1)亚砷酸对CNE-2Z细胞中RASSF1A、p16 mRNA的影响半定量RT-PCR分析CNE-2Z细胞中目的基因RASSF1A、p16 mRNA表达,结果表明随着As2O3作用浓度的增加,处理CNE-2Z细胞48h后,RASSF1A、p16mRNA表达逐渐增强。空白对照组和不同浓度As2O3作用CNE-2Z细胞的处理组之间差异均有统计学意义(P＜0.05),不同浓度As2O3作用CNE-2Z细胞的处理组之间差异也均有统计学意义(P＜0.05)。
(2)亚砷酸处理前后RASSF1A、p16甲基化分析在鼻咽癌细胞中,RASSF1A、p16基因表现为高甲基化状态,而用As2O3作用48h后RASSF1A、p16基因发生去甲基化,随着As2O3作用浓度的增加,RASSF1A、p16基因去甲基化条带的亮度逐渐增强。
(3)亚砷酸对CNE-2Z细胞中RASSF1A、p16蛋白水平的影响Western Blot分析CNE-2Z细胞中目的基因RASSF1A、P16蛋白水平表达,结果表明随着As2O3作用浓度的增加,处理CNE-2Z细胞48h后,RASSF1A、P16蛋白表达逐渐增强。空白对照组和不同浓度As2O3作用CNE-2Z细胞的处理组之间差异均有统计学意义(P＜0.05),不同浓度As2O3作用CNE-2Z细胞的处理组之间差异也均有统计学意义(P＜0.05)。
结论：
As2O3可诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株中RASSF1A、p16基因表达增强,其机制可能为As2O3使RASSF1A、p16基因去甲基化,从而使其重新表达,来抑制鼻咽癌细胞的增殖。