mRNA荧光差异显示筛选肿瘤中高表达的基因

来源 :江苏大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a499262792
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目前,恶性肿瘤已成为危害人类身体健康最严重的疾病之一。据有关中国人口死亡原因调查结果表明,恶性肿瘤死因位居致死原因的第一位。常见的恶性肿瘤主要有食管癌、肺癌、胃癌、白血病和肝癌等。为了探究恶性肿瘤中表达特异的基因,本研究利用荧光差异显示的方法,对比研究食管癌组织和癌旁组织、胃癌癌组织及其癌旁组织、高转移肺癌细胞系(95D)和肺癌细胞系(LTEP-a-2)中高表达的基因,取得了下列几方面的主要结果和结论: 在食管癌、胃癌组织和相对应癌旁组织的对比研究中,应用荧光差异显示技术,切取了30个差异片段。二次PCR扩增,得到差异条带21条。对这些差异片段进行测序,克隆到了9个cDNA片段,其中有6个差异条带来自食管癌组织,3个来自胃癌组织。应用定量PCR的方法对其中的7个片段进行了验证分析,结果表明它们中有5个差异条带在癌组织中表达量远高于相应的癌旁组织,差异在5倍以上,另两个无显著差异。对食管癌中表达差异比对结果对应人类钙结合蛋白(同源性达96%)的基因进行了初步分析。结果表明与家鼠的同源性最高,达88.7%。同时研究了其在不同来源的六种肿瘤细胞中的相对表达量。结果表明,在食管癌细胞株TE1中表达量远高于其他五种肿瘤细胞(p<0.05)。钙结合蛋白在食管癌组织及其细胞系中的高表达推测其在食管癌发生中起着重要作用。 在对比研究高转移肺癌细胞系(95D)和肺癌细胞系(LTEP-a-2)中,在高转移肺癌中切取了转移相关的差异条带7条,克隆到了3个较感兴趣的cDNA片段。荧光定量PCR验证表明,2个为阳性差异条带,它们在高转移肺癌中表达量高出肺癌细胞9倍以上。对其中一个对应人类3号常染色体的开放阅读框1(C3orfl)的差异片段进行了进一步研究。克隆到了该基因的全长,读码框长为858 bp,编码285个氨基酸。荧光定量PCR检测其在六种肿瘤细胞中的表达量结果表明其在高转移肺癌细胞株(95D)中的表达量远高于其他五种肿瘤细胞(p<0.05)。并构建了原核表达质粒pET28a-C3orfl和杆状病毒表达转移质粒HTB-C3orfl。SDS-PAGE表明基因C3orfl在原核和杆状病毒表达系统中得到了特异条带。
其他文献
活性碳纤维(Activated Carbon Fiber,ACF)是一种具有高效吸附功能的材料,有着极高的应用价值。由于ACF材料表面结构的复杂性,现有观测设备在对其的分析和处理上存在着种种不足。
文昌鱼被认为是现存与脊椎动物亲缘关系最近的无脊椎动物,文昌鱼形体结构与脊椎动物相似但是相对简单,基因组没有经历加倍。研究文昌鱼的发育相关基因对于揭示文昌鱼和脊椎动物
WD40家族的一个亚家族DWD(DDB1-binding WD-repeat domain)家族蛋白被证明在CUL4泛素E3连接酶复合体中起到底物识别亚基的作用。但是,在番茄(Solanum lycopersicum)中对这个亚家
进化论研究的核心是描述生物进化的历史和探索进化过程的机制。自本世纪中叶以来,随着分子生物学的不断发展,进化论的研究也进入了分子水平。分子进化是达尔文进化论在分子水平
随着无线宽带业务需求的不断增长,在有限的带宽里提高频谱利用率,成为近年来通信领域研究的热点。正交频分多址接入(Orthogonal FrequencyDivision Multiple Access,OFDMA)是基于
学位
光电探测系统中,目标姿态测量对目标运动状态分析、故障分析等方面都具有重要的理论意义与工程价值,在航天、交通、工业自动化等领域扮演着举足轻重的作用。而在目标姿态测量
学位
多播业务量疏导是光网络多播研究的一个重要方面,由于光网络中大部分业务请求的带宽需求与一个波长的带宽相比都比较小,如果为每个业务请求分配一个独立的波长信道,不可避免
轮询系统作为一类重要的控制模型在自动工业控制、计算机时分复用、通信系统协议、计算机网络协议以及军工等领域,由于其控制方式的公平性、实用性而得到了普遍的应用。但原有
高性能同轴电缆接入系统(HINOC)是利用现有广播电视传输网络,使用同轴电缆带外信道进行数据传输的下一代广播电视系统。为了提高传输效率,要求在16MHz信道带宽上达到100Mbps的
经过五十多年的发展,自动语音识别技术已从孤立词识别发展为大词汇量连续语音识别。然而,目前机器的识别性能仍然无法与人相比,其主要原因之一是人在语音识别过程中综合利用了多
学位