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目前,恶性肿瘤已成为危害人类身体健康最严重的疾病之一。据有关中国人口死亡原因调查结果表明,恶性肿瘤死因位居致死原因的第一位。常见的恶性肿瘤主要有食管癌、肺癌、胃癌、白血病和肝癌等。为了探究恶性肿瘤中表达特异的基因,本研究利用荧光差异显示的方法,对比研究食管癌组织和癌旁组织、胃癌癌组织及其癌旁组织、高转移肺癌细胞系(95D)和肺癌细胞系(LTEP-a-2)中高表达的基因,取得了下列几方面的主要结果和结论:
在食管癌、胃癌组织和相对应癌旁组织的对比研究中,应用荧光差异显示技术,切取了30个差异片段。二次PCR扩增,得到差异条带21条。对这些差异片段进行测序,克隆到了9个cDNA片段,其中有6个差异条带来自食管癌组织,3个来自胃癌组织。应用定量PCR的方法对其中的7个片段进行了验证分析,结果表明它们中有5个差异条带在癌组织中表达量远高于相应的癌旁组织,差异在5倍以上,另两个无显著差异。对食管癌中表达差异比对结果对应人类钙结合蛋白(同源性达96%)的基因进行了初步分析。结果表明与家鼠的同源性最高,达88.7%。同时研究了其在不同来源的六种肿瘤细胞中的相对表达量。结果表明,在食管癌细胞株TE1中表达量远高于其他五种肿瘤细胞(p<0.05)。钙结合蛋白在食管癌组织及其细胞系中的高表达推测其在食管癌发生中起着重要作用。
在对比研究高转移肺癌细胞系(95D)和肺癌细胞系(LTEP-a-2)中,在高转移肺癌中切取了转移相关的差异条带7条,克隆到了3个较感兴趣的cDNA片段。荧光定量PCR验证表明,2个为阳性差异条带,它们在高转移肺癌中表达量高出肺癌细胞9倍以上。对其中一个对应人类3号常染色体的开放阅读框1(C3orfl)的差异片段进行了进一步研究。克隆到了该基因的全长,读码框长为858 bp,编码285个氨基酸。荧光定量PCR检测其在六种肿瘤细胞中的表达量结果表明其在高转移肺癌细胞株(95D)中的表达量远高于其他五种肿瘤细胞(p<0.05)。并构建了原核表达质粒pET28a-C3orfl和杆状病毒表达转移质粒HTB-C3orfl。SDS-PAGE表明基因C3orfl在原核和杆状病毒表达系统中得到了特异条带。