气滞血瘀证是临床常见的一种证型,指因气机郁滞日久不畅,导致血液运行障碍,出现血瘀和气滞并存的病理状态,临床上常见气滞血瘀证所致各种心血管系统疾病、妇科疾病以及精神系统疾病等,危害人体健康。气血是维持人体生命活动的基本物质,《难经本义》有云:“气中有血,血中有气,气与血不可须臾相离,乃阴阳互根,自然之理也。”气能行血,血能载气,一旦气机郁滞就会导致血行瘀阻,进而形成气滞血瘀的症状。经典名方血府逐瘀汤出自清代王清任的《医林改错》,是治疗气滞血瘀证的临床常用方。血府逐瘀汤由桃仁、红花、生地、赤芍、当归、川芎、柴胡、枳壳、桔梗、牛膝、炙甘草1 1味药物组成,具有活血祛瘀、行气止痛之功效,主要治疗气机郁滞、血行瘀阻所致诸证,包括内科、外科以及妇科等多种疾病,且临床疗效显著。目前对于血府逐瘀汤治疗作用机制研究已有不少报道,包括在治疗心肌缺血、缺血性脑卒中、抗动脉粥样硬化等方面的机制研究。但是基于气滞血瘀证相关证候的治疗作用研究、血府逐瘀汤功效的生物学基础和物质基础研究不足,尤其是物质基础研究,目前多集中于血府逐瘀汤某一药理作用的研究上,对于气滞血瘀证的治疗作用的物质基础研究报道较少。本研究在肾上腺素致大鼠慢性气滞血瘀模型的基础上,利用代谢组学技术,探讨血府逐瘀汤对气滞血瘀证的调节作用,并对血府逐瘀汤的活性部位进行物质基础研究。研究目的优化肾上腺素致大鼠慢性气滞血瘀模型的造模剂量,利用代谢组学研究明确气滞血瘀证以及血府逐瘀汤调节气滞血瘀证的生物标志物及代谢途径,在此基础上,对血府逐瘀汤调节气滞血瘀证的活性部位进行筛选,明确其生物标志物群、代谢途径及物质基础,最终阐明血府逐瘀汤调节气滞血瘀大鼠模型的物质基础。研究方法本研究共分为三个部分进行,分别为肾上腺素致大鼠慢性气滞血瘀模型的优化研究、基于靶向代谢组学的血府逐瘀汤功效生物标志物群研究、血府逐瘀汤功效的物质基础研究。第一部分:进行大鼠慢性气滞血瘀证的模型研究,将大鼠分为正常组、低剂量组（0.3mg/kg）、中剂量组（0.6mg/kg）和高剂量组（0.9mg/kg）,皮下注射肾上腺素进行造模,根据大鼠的一般状态、体重、血液粘度以及凝血四项指标选择最佳的造模剂量,并基于高效液相-质谱联用技术,利用HILIC和RPLC两种色谱分离方式、结合QTOF质谱从正离子和负离子两种模式对正常组和三种不同剂量肾上腺素模型组进行非靶向代谢组学研究,挖掘气滞血瘀证的生物标志物及相关代谢通路。第二部分:将大鼠分为正常组、模型组、血府逐瘀汤组,模型组和血府逐瘀汤组按0.6mg/kg剂量皮下注射肾上腺素进行造模,血府逐瘀汤组按1.92g/kg剂量灌胃血府逐瘀汤,利用靶向代谢组学技术对大鼠血浆进行分析,探讨血府逐瘀汤调节气滞血瘀证的生物学基础。第三部分:考察3种大孔吸附树脂对血府逐瘀汤活性部位分离的影响,选择最佳的大孔吸附树脂制备血府逐瘀汤的活性部位,将血府逐瘀汤分为水和30%乙醇洗脱部位（30E）、60%和95%乙醇洗脱部位（95E）以及不溶物部位（BR）,基于靶向代谢组学,探讨了血府逐瘀汤不同活性部位对气滞血瘀大鼠模型的调节作用,筛选出活性部位并对其化学成分进行鉴定。研究结果第一部分:与正常组相比,造模后不同给药剂量的气滞血瘀证模型组大鼠体重都明显降低（P＜0.05或P＜0.01）,在低切、中切、高切变率上均有显著升高,PT缩短、TT缩短、FIB增多,且造模第3天肾上腺素中剂量组和高剂量组大鼠在体重上就显现出差异。实验结果表明,采用皮下注射肾上腺素的方法进行慢性气滞血瘀大鼠模型造模的最佳剂量为0.6mg·kg-1·d-1,在这个剂量下大鼠气滞血瘀的指标差异性显著,且大鼠模型稳定,指标波动小;非靶向代谢组学结果发现了30种气滞血瘀证大鼠模型的生物标志物,且与肾上腺素剂量具有量效关系,包括花生四烯酸、苯酚硫酸盐、乳酸、牛磺酸、吲哚丙烯酸以及各种长链脂肪酸等,主要涉及牛磺酸和亚牛磺酸代谢、花生四烯酸代谢、胆汁酸代谢、嘧啶代谢以及脂肪酸代谢等代谢通路;第二部分:靶向代谢组学结果显示,气滞血瘀模型大鼠血浆中有45种内源性代谢物发生了显著性变化,而血府逐瘀汤对其中20种代谢物进行了显著回调,包括牛磺酸、色氨酸、酰基肉碱、天冬氨酸、甘氨胆酸以及5-HT等,主要涉及牛磺酸和亚牛磺酸代谢、精氨酸代谢、色氨酸代谢以及能量代谢等代谢通路;第三部分:通过筛选最后确定采用D101大孔吸附树脂对血府逐瘀汤进行分离,对血府逐瘀汤不同活性部位调节气滞血瘀大鼠模型的作用进行了靶向代谢组学分析,结果显示,气滞血瘀模型组大鼠血浆中共有19种内源性代谢物发生了改变,血府逐瘀汤30E给药组对其中9种内源性代谢物进行了回调,95E给药组对其中15种内源性代谢物进行了回调,BR给药组对其中17种内源性代谢物进行了回调,3种不同活性部位均能对气滞血瘀证造模引起的代谢紊乱起到调节作用,这些作用体现在不同的代谢通路上,共同起到调节气滞血瘀证的作用。对血府逐瘀汤的活性部位进行定性分析,结果显示,血府逐瘀汤30E部位的主要活性成分为芍药苷、苦杏仁苷、柠檬酸、没食子酸、羟基红花黄色素A和红花黄色素A等,主要来源于桃仁、赤芍、红花等药味;95E部位的主要活性成分为阿魏酸、芍药内酯苷、橙皮苷、新橙皮苷、甘草苷、甘草素、甘草酸、芸香苷、柚皮芸香苷和山奈酚等,来源于甘草、枳壳、当归、川芎、赤芍等药味;血府逐瘀汤不溶物部分在代谢组学结果中显示是有调节作用的,但由于方法和时间所限,尚未完成分析。研究结论血府逐瘀汤的不同活性部位对于慢性气滞血瘀大鼠模型的调节作用体现在不同的靶点和代谢通路上,其中血府逐瘀汤30E部位的主要活性成分为芍药苷、苦杏仁苷、柠檬酸、没食子酸、羟基红花黄色素A和红花黄色素A等,主要来源于桃仁、赤芍、红花等药味,通过牛磺酸和亚牛磺酸代谢、苯丙氨酸代谢以及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成等代谢通路发挥作用;95E部位的主要活性成分为阿魏酸、橙皮苷、甘草苷、甘草酸、芸香苷、柚皮芸香苷和山奈酚等,来源于甘草、枳壳、当归、川芎、赤芍等药味,通过牛磺酸和亚牛磺酸代谢等代谢通路发挥作用。