庆大霉素是多组分混合物,在采用管碟法测定其含量时,常常存在标准品与样品之间不同质问题。因此,需要建立新的庆大霉素含量测定的方法并与管碟法进行比较。经过查阅文献,发现近年来庆大霉素的含量测定方法有微生物检定法、旋光法、光谱法、色谱法等。与管碟法比较,旋光法与光谱法也可以测定庆大霉素全部组分的含量,但旋光法的灵敏度太低。通过对光谱法的比较分析,发现紫外可见分光光度法具有灵敏度高、检测快速等优点,这可以作为建立庆大霉素含量测定方法的研究方向。根据庆大霉素的化学性质,本文寻找到化学性质稳定的水杨醛试剂。经过试验发现,水杨醛与庆大霉素在常温下发生衍生化学反应,且衍生产物在400nm波长处有最大紫外可见吸收。采用单因素多水平设计方法,优化反应条件。结果显示水杨醛与庆大霉素在pH5.5的磷酸盐缓冲液中,经过50℃水浴20分钟,衍生产物的吸收度值最大,实验条件最佳。采用最佳实验条件,依据《中国药典》规定的指导原则,进行紫外可见分光光度法测定庆大霉素含量的方法学验证。结果显示本方法的特异性好;在280～519 U/ml的浓度范围内,衍生产物的吸光度值(A)与庆大霉素浓度值(C)之间具有良好的线性关系,标准曲线A=0.0007C+0.0186,R 值达到 0.999;平均回收率为 100.09±0.8%,RSD 为 0.7%(n=7);衍生产物在0～10分钟内稳定。同时,采用管碟法测定庆大霉素的含量。按照菌悬液制备、培养基制备、灭菌、供试液制备、双碟制备、滴加供试液、培养、抑菌圈测量的流程进行试验,并将测量的抑菌圈直径按照生物检定统计法进行可靠性检测、可信限率及效价计算。独立平行实验4次。结果显示,1次实验结果的可靠性检测参数试品间(F1)不符合判定要求;1次实验结果的可信限率为7.96%,不符合硫酸庆大霉素注射液标准规定(不超过7%)的要求;含量结果平均值为 101.10%,RSD 为 1.7%(n=4)。最后,将紫外可见分光光度法与管碟法进行比较研究。首先分别用紫外可见分光光度法与管碟法测定硫酸庆大霉素注射液中庆大霉素的含量,并将各自检测结果进行比较:然后将紫外可见分光光度法与管碟法的方法学验证结果、硫酸庆大霉素注射液中庆大霉素含量测定结果的显著差异性进行比较。结果显示紫外可见分光光度法测定庆大霉素含量平均值为100.43%,RSD为1.2%(n=104);管碟法测定庆大霉素含量的平均值为101.10%,RSD为1.7%(n=4);紫外可见分光光度法的线性与范围为280～519 U/ml、线性关系R值为0.999、回收率为100.09%±0.8%、RSD为0.7%;管碟法的线性与范围为2～12 U/ml、回收率为100.80%±1.5%/98.7%±1.5%、RSD为1.7%;根据t分布检验法,在P<0.05的置信区间内,t=0.88,小于 1.98[t(0.05,106)]。本文建立紫外可见分光光度法测定庆大霉素含量的方法,具有检测快速,操作方便的特点。同时方法的特异性好、灵敏度与准确度高、重现性好,但是衍生产物的稳定性欠佳。与管碟法比较,两个方法的结果无显著性差异,但紫外可见分光光度法的准确性与重现性更优。因此,紫外可见分光光度法满足庆大霉素含量测定的常量分析要求,能为控制其质量提供新的参考依据,进而保障庆大霉素使用的安全性与有效性。