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第一部分:弥漫大B细胞淋巴瘤伴HBV既往感染患者临床特征及预后分析目的:该部分研究的主要目的是分析合并乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)既往感染的弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者的临床特征及预后。方法:1.纳入2008年1月至2018年12月在天津医科大学肿瘤医院初治的经本院病理科采用病理学及组织学检查而确诊的188例DLBCL患者。所有患者均具有初诊时流行病学检查结果以及保存完好的新鲜组织或石蜡组织。2.收集所有患者初诊时的临床病理资料,包括:年龄、性别、病理亚型、临床分期、B症状、IPI评分、结外受累数目、脾受累情况、Ki-67、LDH、β2-MG、淋巴细胞绝对值、淋巴细胞百分比、疗效评价以及含乙肝五项在内的流行病学检查结果。3.通过查询门诊和住院病历以及打电话的方式随访、记录患者的生存情况,随访截止日期为2020年1月。4.采用SPSS 25.0软件分别对各组患者的临床病理特征及预后进行统计学分析。分类变量资料使用χ~2检验,连续变量资料使用独立样本t检验,采用Graphpad Prism 8软件Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并采用Logrank检验。取P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.纳入的188例DLBCL患者中,HBV现症感染者26例,既往HBV感染者63例,HBV未感染者99例。将HBV现症感染患者剔除,本研究仅针对HBV既往感染者和HBV未感染者。该研究中,DLBCL伴HBV既往感染的比例约为33.51%(63/188)。2.DLBCL合并HBV既往感染的患者中男性较多(P=0.011),Ki-67更高(Ki-67>50%vs Ki-67≤50%,P=0.050)且治疗效果更差(CR+PR vs SD+PD,P=0.021)。3.DLBCL合并HBV既往感染与年龄、病理亚型、临床分期、B症状、IPI评分、结外受累数目、脾受累情况、LDH、β2-MG、淋巴细胞绝对值、淋巴细胞百分比等无关(P>0.05)。4.生存分析显示,DLBCL患者中伴HBV既往感染者比HBV未感染者总生存更差(P=0.039)。亚组分析中,non-GCB亚型(P=0.048)、晚期(P=0.003)、IPI评分>2分(P=0.003)、LDH水平升高(P<0.001)的DLBCL患者,HBV既往感染者比HBV未感染者总生存更差。5.单因素生存分析显示,病理亚型、临床分期、IPI评分、B症状、LDH水平、淋巴细胞百分比和HBV既往感染均为DLBCL患者OS的不良预后因素。多因素分析显示,病理亚型、IPI评分和淋巴细胞百分比均为OS的独立预后不良因素,而HBV既往感染并不能独立影响DLBCL患者预后。结论:1.DLBCL合并HBV既往感染的患者具有其独特的临床特点:男性偏多、Ki-67更高、治疗效果更差。2.DLBCL患者中,HBV既往感染者比HBV未感染者总生存更差。并且在恶性程度较高、侵袭性较强的DLBCL患者中,HBV既往感染是不良预后因素之一,而在低危DLBCL患者中,并未观察到这种不良预后影响。第二部分:弥漫大B细胞淋巴瘤伴HBV既往感染患者基因突变谱的探索目的:挖掘HBV既往感染与HBV未感染DLBCL患者之间的差异突变基因。方法:1.采用美国Illumina公司的HiSeq X Ten高通量基因测序仪对上述188例DLBCL患者的肿瘤组织/外周血进行全外显子组测序/靶向测序。2.首先对其中42例同时具备新鲜肿瘤组织/石蜡组织及匹配的外周血DLBCL患者进行全外显子组测序;然后根据测序结果,结合既往文献报道的热点驱动基因,我们自主设计了一个含有307个基因的panel;最后对188例患者进行了靶向测序。3.将测序得到的原始数据过滤处理后,采用Mu Tect、Var Scan、CONTRA等软件进行变异识别,ANNOVAR进行变异注释,SIFT和Polyphen-2软件预测基因突变对蛋白质结构及功能影响,并采用GO富集分析和KEGG富集分析进行基因的功能分析和信号通路分析,进一步筛选出差异突变基因。结果:1.我们研究剔除了26例HBV现症感染患者的测序结果,仅分析HBV既往感染组和HBV未感染组的测序情况。162例患者测序结果中,共检测出总突变数74062个,其中非沉默突变7270个,共涉及264个不同的基因。在所有非沉默突变的SNVs中,G>A和C>T是最常见的单碱基突变类型,占全部碱基突变类型的39.1%。2.在我们的DLBCL研究队列中,最常见的突变基因(≥20%)有16个,包括MST1L,MUC4,MUC17,TTN,SIRPA,IGLLS,SPATA31C1,IGSF3,CEP164,PIM1,TP53,PLEC,BTG2,CPEB2,TNXB,KMT2D。3.选取SIFT评分<0.05或Poly Phen-2评分>0.909的突变位点,进一步筛选出9个HBV既往感染对编码蛋白有影响的特征突变基因,包括:MUC4,CPEB2,LAMC3,TCHH,FLG2,ANKRD11,ABCA7、MPEG1和EPPK1。4.通过基因功能分析和信号通路分析发现,HBV既往感染的DLBCL可能与Wnt、细胞运动、TP53等通路有关。结论:1.我们研究发现9个HBV既往感染与HBV未感染DLBCL患者的差异基因,包括MUC4、CPEB2、LAMC3、TCHH、FLG2、ANKRD11、ABCA7、MPEG1、EPPK1等。涉及的功能包括:影响细胞运动、抗免疫识别、抗凋亡、促进肿瘤细胞增殖及血管形成、促进肿瘤细胞远处转移和调控HBV复制等。其中MUC4、CPEB2、LAMC3和EPPK1在二组中具有显著差异。前三个基因突变在HBV既往感染组中更多见,而EPPK1在HBV未感染组中更常见。2.HBV既往感染DLBCL可能与Wnt、细胞运动、TP53等多条信号通路相关。