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目的:在分子生物学水平,进一步深入研究颅脑创伤后神经细胞延迟性死亡的机制,探讨美洛宁对大鼠脑创伤后学习记忆功能的影响,为临床治疗颅脑创伤病人提供一定的理论基础。 方法:1.采用Marmarou 1994年创立的方法建立大鼠重型闭合性颅脑创伤模型。2.将Wistar大鼠300只随机分为脑创伤组(96只)、美洛宁治疗组(96只)、假手术组(96只),每组又分别划分成伤后3小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、168小时及336小时等8个时相组,另取12只作为正常对照组。3.给药方法:美洛宁治疗组经致伤后,给予腹腔注射美洛宁(30mg/kg/天),直至各时相点处死;脑创伤组、假手术组及正常对照组在相同时间给予等量的生理盐水腹腔注射作为对照。4.另取48只大鼠随机分为脑创伤组(12只)、美洛宁治疗组(12只)、假手术组(12只)及正常对照组(12只),进行水迷宫测试。5.采用HE染色、免疫组织化学、原位细胞凋亡检测及Morris水迷宫等方法,动态观察大鼠颅脑创伤后海马区的组织病理改变,p53、Bax和Fas蛋白的表达情况以及空间学习记忆的改变。6.通过比较伤后各组相同时相点海马区神经细胞凋亡、p53、Bax和Fas蛋白表达以及学习记忆功能的变化特征,探讨美洛宁对大 中文摘要鼠伤后学习记忆功能障碍的影响。 结果:1.重型闭合性颅脑创伤后海马CAZ上区于伤后72小时可观察到广泛的神经元变性、坏死N 随后该病理趋势逐渐减缓上.凋亡阳性细胞在伤后24小时开始出现,随时间延长数量逐渐增多,伤后7天达高峰随后犁量开始下降。凋亡阳性细胞主要位于海马CAZ上 区及齿状回。假手术组各时相点及正常对照组海马CAZ上区未检测出凋亡阳性细胞J.大鼠伤后3小时海马CAZS区出现P53蛋白表达。12小时明显增强,12大达高峰,3天即有所下降,于伤后7无己不能检测到p53蛋白的免疫反应,镜下观察可见阳性细胞着棕黄色一 假手术组各时相点及正常对照组海马CAZ上区未检测出p53蛋白表达阳性细胞。4.大鼠伤后6小时海马CAZ刁区Bax蛋白的免疫反应增强,于2刁天达高峰,伤后7天明显下降,于14天恢复至正常水平。正常对照组CAZ刁区可见轻度的Bax蛋白的免疫反应,假手术组各时相点均与正常对照组无明显差异。5.大鼠伤后6小时海马CAZ习区出现Fas蛋自的表达增加,于12小时明显增强,23天达高峰,7天明显下降,于14天Fas蛋白免疫反应消夫。假手术组各时相点及正常对照组海马CAZ刁区未检测到Fas蛋白的表达。6.美洛宁治疗组伤后海马神经细胞P53、Bax及Fas蛋白表达高峰均较创伤组明显下调。凋亡阳性细胞密度亦较创伤组有所下调。7.Moms水迷宫测试表明,伤后大鼠存在明显的空间学习记忆障碍,于伤后9天及10天潜伏期明显延长,搜索运动轨迹显示:美洛宁治疗组、正常对照组及假手术组大鼠随时间在搜索策略的改变上较脑创伤组更 2 中文摘要 为理想。 结论:1.重型闭合件颅脑创伤后,海马区神经元存 在有延迟性细胞死亡现象其形式不仅表现有坏死,也表现 有细胞的凋亡。2.海马区神经细胞的延迟性死亡是造成 大鼠伤后长期学习记忆功能障碍的主要因素之一J.P53、 Bax及Fas蛋白的表达上调可能参与调控了细胞凋亡的过 程。4.美洛宁可能通过抑制p53蛋白、Fas蛋白及Bax蛋 白的表达,从而抑制神经细胞凋亡。5.美洛宁可能通过 抑制神经细胞坏死凋亡、促进细胞修复及重塑信息环路对 伤后学习记忆功能障碍发挥治疗作用。