革兰氏阴性菌感染性疾病在兽医临床实践中极为常见，LPS是该类病原对宿主造成损害的最主要致病因子之一，LPS通过激活TLR4信号转导通路，引起宿主的炎性应答反应，PPAR-γ在其中起到重要的调控作用。以TLR4信号转导通路关键节点作为新靶标进行抗炎治疗，既是兽医临床疾病治疗中控制炎症的新思路，也是当前药物开发的新热点。本课题选择我国传统中药材厚朴中所含有的天然结构化合物厚朴酚作为研究对象，首先在小鼠肺损伤模型上证实其抗炎效果，其次在RAW264.7细胞上探索其抗炎机制，然后对其作用靶标进行初步确认，最后在小鼠乳腺炎模型上观察其治疗效果，从而检验兽医临床实践中从TLR4信号转导通路进行抗炎治疗的新思路，并为相应药物的研发提供初步的实验数据和参考。本论文首先初步验证厚朴酚抗炎效果，通过鼻腔滴注LPS建立急性肺损伤炎症模型，实验分为空白对照组、LPS刺激组、LPS+厚朴酚（5、10、20mg/kg体重）实验组和LPS+DEX（5mg/kg体重）组，厚朴酚和DEX分别在LPS刺激前1h腹腔注射给药。制备肺泡灌洗液，检测灌洗液中炎性细胞数及TNF-α、IL-1β和IL-6水平；采集小鼠肺组织，称重计算肺湿干重（W/D）比率，测定髓过氧化物酶（MPO）活性，同时制备组织切片观察肺脏病理组织学变化。结果与LPS刺激组相比，厚朴酚能明显降低肺泡灌洗液中炎性细胞数及TNF-α、IL-1β和IL-6水平；降低小鼠肺脏湿干重比率、MPO活性；减轻LPS诱导的小鼠肺脏组织的炎性损伤。以上实验初步证实在LPS诱导的急性肺损伤模型中厚朴酚具有确实的抗炎效果。其次探索厚朴酚抗炎机制，选择LPS刺激小鼠RAW264.7细胞炎症模型作为工具，采用MTT确定在低于60μg/ml浓度范围内，厚朴酚对RAW264.7细胞没有细胞毒性。RAW264.7细胞培养液中分别添加15、30和60μg/ml的厚朴酚，然后再添加LPS刺激，ELISA和RT-PCR检测厚朴酚对LPS刺激的RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β和IL-6表达影响；Western Blot检测厚朴酚对LPS刺激的RAW264.7细胞TLR4、NF-κB和MAPKs（JNK、ERK、p38）信号通路的影响。结果厚朴酚可在基因和蛋白水平上抑制LPS诱导的TNF-α、IL-1β和IL-6的表达；Western blot结果显示厚朴酚可以抑制LPS诱导的TLR4、NF-κB和MAPK（sJNK、ERK、p38）蛋白表达，且呈剂量依赖性。上述结果提示厚朴酚的抗炎作用机制是通过抑制TLR4表达及其下游的NF-κB和MAPKs激活，进而下调TNF-α、IL-1β和IL-6的表达产生而发挥抗炎作用。再次初步确认厚朴酚抗炎作用靶点，通过PPAR-γ配体结合实验和Westernblot检测厚朴酚对PPAR-γ的结合和激活情况。选用PPAR-γ特异性拮抗剂GW9662阻断PPAR-γ，再检测厚朴酚对LPS诱导的TLR4表达的影响。结果显示厚朴酚可以结合并激活PPAR-γ，同时发现厚朴酚对LPS诱导的TLR4表达的影响可以被GW9662阻断，表明厚朴酚通过结合并激活PPAR-γ而发挥抗炎作用。初步确认PPAR-γ可能是厚朴酚的作用靶点。最后在小鼠乳腺炎模型上观察厚朴酚抗炎效果，通过乳导管注射LPS构建小鼠乳腺炎模型，观察厚朴酚对小鼠乳腺炎的治疗作用。实验分为空白对照组、LPS刺激组、LPS+厚朴酚组（5、10、20mg/kg体重）和LPS+DEX组（5mg/kg体重），厚朴酚和DEX分别在LPS刺激前1h和刺激后12h腹腔注射给药。采集小鼠乳腺组织，测定髓过氧化物酶（MPO）活性，切片观察乳腺组织的病理组织学变化，ELISA检测乳腺组织TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白表达水平。结果显示，与LPS刺激组相比，厚朴酚可显著降低乳腺组织MPO活性及炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达，病理切片表明厚朴酚可显著地降低LPS对乳腺组织的损伤。结果表明，厚朴酚对LPS诱导的小鼠乳腺炎模型有治疗效果。通过上述研究，本论文对厚朴酚抗炎作用机制和作用靶点进行了初步研究，并在LPS诱导的小鼠乳腺炎模型上观察了其治疗效果，发现厚朴酚通过结合并激活PPAR-γ，从而下调TLR4表达并抑制下游NF-κB和MAPKs激活，最终使TNF-α、IL-1β和IL-6等炎性因子的表达水平下降。以上结果为检验兽医临床实践中从TLR4信号转导通路进行抗炎治疗的新思路，并为相应药物的研发提供初步的实验数据和参考。