【摘 要】
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目的:1.成功建立豚鼠对大鼠非协调性异种肝移植模型。2.探讨人白介素10(Human interleukin10,hIL-10)基因修饰的骨髓间充质干细胞(Marrow mesenchymal stem cells,MSCs)对大鼠原位异
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目的:1.成功建立豚鼠对大鼠非协调性异种肝移植模型。2.探讨人白介素10(Human interleukin10,hIL-10)基因修饰的骨髓间充质干细胞(Marrow mesenchymal stem cells,MSCs)对大鼠原位异种肝移植的免疫反应的作用及其机制。
方法:1.通过对传统“二袖套”法肝移植手术在灌注、吻合等方面进行改良,建立稳定的豚鼠至大鼠的非协调性异种肝移植模型,并分预实验和正式试验两组进行手术时间和手术成功率的比较。2.通过Fiocll分离法分离骨髓单个核细胞,体外贴壁培养扩增出MSC并对其鉴别。复苏hIL-10修饰的MSCs进行培养,用DAPI染色剂进行荧光标记,并在构建肝移植模型过程中分组施加不同的处理方式(生理盐7+地塞米松、MSC+地塞米松、hIL-10-MSC+地塞米松),分别为空白对照组、MSC组和hIL-10-MSC组。观察受鼠的存活时间、肝功能情况,对术后24小时移植肝组织的IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、TNF-α进行检测。在术后1天、3天分别对hIL-10-MSC组受鼠肝脏组织进行病理切片,并在荧光显微镜下观察。
结果:1.通过对传统“二袖套”法进行改良,并在大量手术的基础上,使肝移植模型的建立大大缩短了手术时间,提高了手术成功率,并成功建立了稳定的豚鼠对Wistar大鼠的非协调性异种肝移植大鼠模型。2.通过观察以及各项指标的检测发现,hIL-10-MSC组与空白组、MSC组相比,大鼠生存时间延长、肝功能好转、细胞因子IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、TNF-α表达明显降低,IL-4、IL-10表达显著升高。而且通过肝脏组织病理切片发现肝组织结构有一定恢复,并可发现大量荧光染色细胞。
结论:1.本实验通过大量手术操作经验的积累以及对手术方式的改进,明显提高了手术成功率,可用作大鼠异种肝移植实验可靠动物模型的制作。2.hIL-10修饰的骨髓间充质干细胞对移植肝脏的保护作用可能通过其可抑制IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、TNF-α细胞因子的表达以及促进细胞因子IL-4、IL-10的表达来实现。
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