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结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染性疾病。近年来,耐多药结核(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)患者以及广泛性耐药结核(extensively drug-resistant tuberculosis,XDR-TB)患者案例逐渐增加,其中 XDR-TB患者治疗时间更长,治愈难度更大。此外,临床上结核菌异质性耐药的情况也越来越多被发现,增加了分子诊断的难度。目前,对于耐药结核仍然缺少临床适用的快速、高灵敏的诊断方法。为了实现XDR-TB的早期诊断,有效指导临床医生用药,本研究基于多色熔解曲线分析技术,建立结核分枝杆菌二线药物耐药突变检测体系,包括氟喹诺酮类药物耐药检测体系以及注射类二线药物耐药检测体系。第一章,绪论。主要介绍结核病概况,结核病临床诊断技术,结核分枝杆菌异质性耐药以及多色熔解曲线分析技术。第二章,氟喹诺酮类药物耐药突变检测体系的建立。为了解决对结核分枝杆菌氟喹诺酮类药物耐药突变类型识别区分的问题,以及实现低水平异质性耐药突变检测,辅助医生早诊断、精确用药,本研究基于多色熔解曲线分析技术,建立了单重双色检测体系,FQ-MMCA体系。体系针对氟喹诺酮类药物gyrA基因的耐药决定区设计探针,实现异质性突变检测能力达5%-20%突变水平;利用781份临床分离株对体系的临床诊断性能进行评价,结果显示,FQ-MMCA体系的敏感性为92.3%,特异性为97.6%。第三章,注射类二线药物耐药检测体系的建立。基于多色熔解曲线技术,本研究建立单管双重四色体系,SL-DeepMelt体系,实现对注射类二线药物耐药基因rrs基因1401、1402和1484位点以及eis启动子区-10、-13、-14以及-37位点设计探针进行检测。本体系实现对最高突变频率位点rrs1401 A>G异质性检出能力达1%;本研究利用488份临床分离株对体系的临床诊断性能进行评价,结果显示,SL-DeepMelt体系的敏感性为90.5%,特异性为97.8%。本体系的优势在于单管实现多个位点的检测,大大降低临床检测操作复杂性;同时SL-DeepMelt体系实现低水平异质性耐药突变检测,有利于结核分枝杆菌注射类二线药物耐药的早期快速诊断。