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目的检测分析临床膀胱癌组织和正常膀胱组织TERE1/UBIAD1表达及Ras-MAPK信号通路的变化。方法采用免疫组化检测分析人正常膀胱组织及膀胱癌组织中TERE1和端粒逆转录酶(hTERT)的蛋白表达水平：用RT-PCR及western blotting检测膀胱癌组织中TERE1和hTERT的表达水平及Ras-MAPK信号通路关键分子的变化。结果1.免疫组化结果表明相对于正常膀胱组织,膀胱癌组织中TERE1染色明显减低。按组织学分级G3-4期TERE1染色阳性率为16.13%(5／31例数),与G2期阳性率TERE1为51.85%(14／27)相比具有显著性差异,与G1期阳性率为76.00%(19／25)相比差异具有极显著性；膀胱癌按临床分期T2期TERE1染色阳性率为27.27%(6／22),T3-4期TERE1染色阳性率为16.00%(4／25),与Ta期94.12%(16／17)和T1期阳性率为68.42%(13／19)相比,具有显著性差异。2.膀胱癌组织中TERE1的mRNA和蛋白表达水平与正常膀胱组织相比明显下降(P<0.05)。3.癌组织中hTERT的mRNA和蛋白表达与正常膀胱组织相比明显上升(P<0.05)。4.膀胱癌组织中磷酸化ERK、磷酸化MEK(1／2)、磷酸化B-Raf(Ser455)及磷酸化C-Raf(Ser338)蛋白表达水平与正常组织相比明显增加(P<0.05),而膀胱癌组织与正常膀胱组织中总的ERK、MEK(1/2)、A-Raf、B-Raf, C-Raf及磷酸化A-Raf (Ser299)蛋白表达没有明显差异。结论膀胱癌中TERE1/UBIAD1表达较正常组织明显下调,且与膀胱癌分级分期密切相关,高恶性度肿瘤未能检测到TERE1/UBIAD1的表达。膀胱癌中Ras-MAPK信号通路关键分子较正常组织相比明显被激活；hTERT表达增加。TERE1/UBIAD1可能通过Ras-MAPK信号通路激活影响膀胱癌的形成。第二部分TERE1／UBIAD1抑制膀胱癌的分子机制研究目的研究TERE1/UBIAD1抑制膀胱癌的作用机制是否通过Ras-MAPK信号通路及作用的分子靶点。方法1.采用RT-PCR及western blotting检测膀胱癌细胞系T24中TERE1和hTERT的mRNA和蛋白表达水平及Ras-MAPK信号通路中关键分子的变化。2. siRNA干扰技术实验：分阴性对照组、转染试剂对照组、TERE1-291-siRNA组、TERE1-322-siRNA组、TERE1-396-siRNA组,将化学修饰的TERE1-siRNA oligos转染L02正常细胞系48小时后,用RT-PCR及western blotting检测TERE1和hTERT的mRNA及蛋白表达水平,western blotting分析Ras-MAPK信号通路关键分子的变化,用细胞计数和MTT法检测细胞增殖情况。3.MEK抑制剂U0126实验：分阴性对照组、TERE1-291-siRNA组、TERE1-322-siRNA组,将化学修饰的TERE1-siRNA oligos转染L02正常细胞系48小时后再加入MEK抑制剂U0126作用30分钟,western blotting检测Ras-MAPK信号通路关键分子的变化。结果1.膀胱癌细胞系T24与正常细胞系L02比较,TERE1的mRNA及蛋白表达水平明显下调,Ras-MAPK信号通路分子磷酸化的ERK表达明显上升；hTERT的mRNA及蛋白表达增加。2.与阴性对照组或转染试剂组相对比,化学修饰的TERE1-291-siRNA oligos和TERE1-322-siRNA oligos转染正常细胞48小时后能明显将细胞TERE1基因沉默,使hTERT的mRNA和蛋白表达水平上升(P<0.05),磷酸化的ERK蛋白表达水平显著增加(P<0.01),同时细胞数目增多、细胞增殖加快。3.TERE1-291-siRNA和TERE1-322-siRNA作用组,加抑制剂U0126与不加抑制剂U0126相比,Ras-MAPK信号途径中关键分子ERK的蛋白磷酸化被抑制,hTERT的蛋白表达被部分抑制。结论TERE1基因沉默能激活细胞Ras-MAPK信号通路及导致细胞增殖明显加快,MEK抑制剂能阻滞TERE1下调引起的Ras-MAPK信号通路的激活,部分阻滞hTERT蛋白表达。TERE1可能作为Ras-MAPK信号通路的负向调节因子,在膀胱癌的发生中有重要作用。