【摘 要】
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目的:研究血管内皮细胞对前列腺癌细胞增殖与多西他赛化疗耐药的影响,并探讨其中可能的分子机制。方法:1.采用Transwell小室构建共培养体系,通过CCK-8、Ed U和Annexin V-FITC/PI分别检测细胞增殖和对多西他赛化疗耐药的影响,WB检测凋亡相关分子的表达情况;利用裸鼠皮下成瘤、免疫组化及TUNEL体内检测血管内皮细胞对前列腺癌细胞增殖与耐药的影响。2.采用PCR及WB检测共培养
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（项目编号 81300625）；
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目的:研究血管内皮细胞对前列腺癌细胞增殖与多西他赛化疗耐药的影响,并探讨其中可能的分子机制。方法:1.采用Transwell小室构建共培养体系,通过CCK-8、Ed U和Annexin V-FITC/PI分别检测细胞增殖和对多西他赛化疗耐药的影响,WB检测凋亡相关分子的表达情况;利用裸鼠皮下成瘤、免疫组化及TUNEL体内检测血管内皮细胞对前列腺癌细胞增殖与耐药的影响。2.采用PCR及WB检测共培养后前列腺癌细胞中ERG的表达情况;通过细胞因子芯片及ELISA筛选出共培养组与非共培养组细胞上清之间的差异细胞因子,并利用WB检测各个候选细胞因子与ERG的关系,确定影响ERG表达最明显的细胞因子;构建ERG过表达慢病毒载体,建立过表达ERG的前列腺癌细胞株,采用CCK-8,Annexin V-FITC/PI检测ERG对前列腺癌细胞多西他赛化疗耐药能力的影响,WB检测ERG过表达后AKT及m TOR的变化,并用CCK-8、流式及平板克隆实验研究抑制AKT信号通路后过表达ERG的前列腺癌细胞株对多西他赛耐药性的影响。结果:1.前列腺癌细胞与血管内皮细胞共培养后,前列腺癌细胞的增殖能力与对多西他赛的耐药性增加,细胞凋亡减少;裸鼠皮下成瘤实验表明血管内皮细胞可增加前列腺癌细胞体内成瘤与对多西他赛化疗的耐药能力。2.前列腺癌细胞与血管内皮细胞共培养后前列腺癌细胞ERG的表达增高;过表达ERG可以促进前列腺癌细胞对多西他赛的耐药性,并且这个作用可以被si ERG逆转;血管内皮细胞分泌的FGF2在共培养后有明显增加,FGF2可以促进前列腺癌ERG的表达,并且这种效应会被FGF2抑制剂逆转;过表达ERG的前列腺癌细胞中AKT和m TOR的磷酸化水平增加,表明ERG可以调节AKT/m TOR活性的变化。结论:我们发现血管内皮细胞可以促进前列腺癌细胞的增殖并且抑制多西他赛诱导的细胞凋亡,体内实验证实血管内皮细胞可以促进肿瘤生长并减弱多西他赛的治疗作用。血管内皮细胞分泌的FGF2可促进前列腺癌细胞ERG的表达,进而增加AKT和m TOR的磷酸化水平,促使前列腺癌细胞对多西他赛的耐药性。为前列腺癌化疗耐药的机制研究提供新的方向和治疗靶点。
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