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目的:人工合成一种表面带阳性电荷的高分子材料——氨基甘露聚糖（Aminoglucomannan,AGM）。研究其分子量、紫外－可见吸收光谱、电导率等物理和化学性质，及与核酸（质粒DNA等）在一些作用因素影响下的聚合过程，并将二者聚合的复合物进行体外HEK239细胞转染实验，评价AGM作为基因治疗载体的有效性及安全性。希望能够开发一种安全有效的非病毒基因载体。方法:1. AGM的合成：配制甘露聚糖(GM)水溶液，乙醇沉淀后，去离子水复溶。取20mL该溶液，加入不同比例的氨水，超声波催化产生氨解反应，获得不同程度氨基化的AGM；2. AGM理化性质的检测：（1）用高效液相色谱法分析GM和AGM的纯度和分子量；（2）在光学显微镜下观察AGM形成的颗粒；（3）用电导仪测定其电导率、可溶性固体总量（TSD）及盐度；（4）用紫外－可见分光光度仪扫描GM、AGM及氨水等，观察其最大吸收波长；3. AGM和质粒DNA聚合的研究：用琼脂糖电泳法观察质粒DNA条带形态及移动的变化，研究二者聚合形成复合物的能力。主要包括：AGM的浓度、氨基化程度、pH值及溶液的NaCl对该聚合过程的影响，以及NaCl对该复合物稳定性的影响。另外还研究了将AGM进行预加热后与质粒聚合的能力；4. <WP=8>AGM细胞毒性的检测：用含1.25％－10％（v/v）AGM的培养液培养HEK293细胞，培养48h后，用MTT法检测各组的吸光度，用t检验进行比较；5. AGM- pEGFP-C1复合物的细胞转染作用：使用HEK293细胞进行细胞转染实验，设立五组：A：预加热组、B：后加热组、C：非加热组、D：质粒对照组和E：阳性对照组。在A、B和C组包括30μL、20μL、10μL和5μL /孔四种体积的AGM和0.5μg质粒pEGFP-C1聚合，分别将这些复合物转染HEK293细胞。观察细胞内绿色荧光蛋白的表达情况；6. AGM-转运寡核苷酸的细胞转染作用：将荧光试剂罗丹明标记的寡核苷酸和AGM聚合后，加入HEK293细胞中培养，用荧光显微镜观察细胞内的红色荧光点。结果: 1. AGM的理化性质：（1）AGM可自聚成各种的颗粒，氨基化程度越高颗粒越大；（2）其电导率、TDS较未氨基化前升高近30倍；加入的氨少，得到的AGM的电导率、TDS低；（3）纯度和分子量： GM和AGM的保留时间相近，均为单一主峰，纯度分别为100％和93.5％；二者的分子量约80,000 D左右；（4）紫外－可见光谱：AGM的吸收峰在λmax＝209nm，峰形“拖尾”，其波长接近氨水（λmax＝207nm），峰形甘露聚糖（λmax＝192nm）的相似；2. AGM和质粒DNA的聚合实验结果：（1）和质粒对照比较，AGM和质粒复合物在凝胶电泳上表现为新的泳动较慢的条带、质粒条带消失或滞留在上样孔。浓度越高或氨基化程度高的AGM的结果越明显；（2）二者聚合的最适pH 在6-7时；（3）AGM溶液中的NaCl越低，复合物的形成越多，并且复合物<WP=9>的稳定性越好；（4）AGM经过80℃加热1－2h后，其DNA聚合能力降低或消失；3. AGM的细胞毒性：含2.5％～10％（v/v）的AGM组的OD490值略高于空白对照组，p＜0.01；4. AGM将pEGFP-C1转染到细胞,并表达GFP: 转染后，在荧光显微镜下,200倍视野中观察并计数每组的绿色荧光点：A组：3±0.8；B组：6±1.5；C组: 12.2±2.1；D组: 0.5±0.1；E组:30±4.6。实验组的GFP出现较阳性对照晚，可持续20d；5. AGM将寡核苷酸转入HEK293细胞内：5－24h即可观察到HEK293细胞内出现大量的红色荧光点。结 论: 1.自行制备的AGM表面具有阳性电荷，具有自聚的特性；2.在适当的条件下，AGM可以和质粒DNA聚合；3.作为基因载体，AGM能有效地将pEGFP-C1和寡核苷酸导入HEK239细胞。4. AGM对HEK293细胞无毒性；反而有促进细胞生长的作用。