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本研究应用双拷贝抑制素与乙肝表面抗原基因的融合表达质粒pCISI和pEGISI免疫大鼠,通过分析免疫原种类、免疫剂量、免疫次数对免疫应答、卵泡发育和生殖内分泌激素水平的影响,旨在比较两种抑制素基因疫苗的效果,探讨抑制素基因免疫的作用机制。 1 抑制素基因免疫的免疫反应性及其影响因素 将90只大鼠随机分为9组(n=10)。采用大鼠股四头肌三点注射法,每次免疫前24小时注射0.5%盐酸普鲁卡因100μL。6个实验组:2种真核表达质粒(pCISI和pEGISI)分别按10μg/100μL、50μg/100μL、100μg/100μL共3个剂量于预处理相同部位注射;3个对照组:生理盐水组注射100μL生理盐水,对照质粒1组注射100μ/100μL pcMV-S,对照质粒2组注射100μg/100μL pEGFP-N1,注射方法同试验组。首次免疫4周后加强免疫1次,免疫剂量、方法同首次免疫。 6个实验组抗体阳性率在10%～50.0%,抗体阳性组与抗体阴性组的吸光值比值(P/N值)最高为8.98。pCISI两次免疫大鼠,可获得23.3%(7/30)抗抑制素抗体阳性鼠,加强免疫后4周,100μg剂量组抑制素抗体P/N值明显高于10μg和50μg组,但免疫剂量的增加并没有增加抗体阳性鼠的比例。pEGISI两次免疫大鼠,可获得20.0%(6/30)的抗体阳性鼠,增加免疫剂量可提高抗体水平和抗体阳性鼠的比例。以上研究结果表明,抑制素与乙肝表面抗原融合基因表达质粒免疫大鼠可产生抗抑制素抗体。综合分析免疫鼠的抗抑制素抗体水平及阳性鼠的抗体水平,发现pCISI免疫大鼠,50μg剂量免疫产生的抗体水平最高;pEGISI免疫大鼠,100μg剂量免疫产生的抗体水平最高。免疫剂量的增加并不一定能增加抗体阳性鼠的比例。 2 抑制素基因免疫对大鼠生殖及生殖内分泌的影响 pCISI免疫大鼠,100μg免疫组的成熟卵泡发育数比对照组增加了6.4个(P<0.05),而用pEGISI免疫大鼠,10μg、50μg、100μg剂量组成熟卵泡发育数比对照组分别多4.3、6.4和5.8个(P<0.05)。pCISI两次免疫后,100μg剂量组卵泡发育程度明显提高(P<0.05)。pCISI加强免疫4周时的FSH水平实验组与对照组之间没有显著差异(P>0.05),pEGISI免疫大鼠,50μg、100μg剂量组动情期血浆FSH水平高于对照组,且明显高于10μg剂量组动情期血浆FSH水平(p<0.05)。pCISI两次免疫大鼠后的血