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目的:研究金线莲多糖(Anoectochilus roxburghii polysaccharose,ARP)对糖尿病小鼠肾损伤的保护作用及其机制。方法:(1)高脂饮食(High-fat diet,HFD)喂养10 d,使用低剂量(140 mg/kg)链脲菌素(Streptozotocin,STZ)腹腔注射诱导ICR小鼠的II型糖尿病模型。采用二甲双胍(阳性对照药物,200 mg/kg)和ARP(100,300 mg/kg)对小鼠口腔灌胃,每天一次,连续给药15 d后,小鼠摘眼球处死取血,解剖小鼠,取肾脏组织置于10%中性福尔马林溶液和-80°C冻存;(2)实验中记录小鼠体重,并于造模成功当天(0 d)、给药7 d和15 d检测ARP对小鼠空腹血糖水平的影响;(3)检测ARP对糖尿病小鼠肾脏过氧化氢酶(CAT)活性和还原型谷胱甘肽(GSH)浓度的影响;(4)通过对糖尿病小鼠肾脏组织的病理检查,考察ARP对糖尿病小鼠肾脏细胞结构变化的改善作用;(5)western blot检测ARP对糖尿病小鼠肾脏p38 MAP Kinase信号通路关键蛋白p38/p-p38、MKK3/6、p-MKK3/6,以及下游纤粘连蛋白(Fibronectin,FN)表达水平的影响。Elisa测定ARP对糖尿病肾病小鼠肾脏中单核细胞趋化因子(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)表达量的影响。(6)明胶酶谱法检测ARP对糖尿病小鼠肾脏基质金属蛋白酶(MMPs)活性的影响;(7)Western blot测定ARP对糖尿病小鼠肾脏ERK1/2信号通路激活的影响,及细胞凋亡相关因子Bax、caspase-9和caspase-3表达水平的作用。结果:(1)经HFD/STZ诱导的小鼠,72 h后空腹血糖水平明显升高(≥11.1mmol/L),并且小鼠体重逐渐降低,小鼠排尿明显增多,提示糖尿病小鼠模型已成功建立;(2)病理学检查结果显示,糖尿病小鼠肾小球和肾小管出现明显损伤,模型组小鼠肾脏出现明显的肾小管上皮细胞膨大,肾小球萎缩、体积明显减小,肾小球基底膜增厚,肾小球系膜细胞增殖、膨胀等症状,提示糖尿病小鼠肾脏出现明显损伤。然而,ARP(100,300 mg/kg)能够明显改善糖尿病肾病小鼠肾小管的损伤,恢复肾小球正常形态,缓解肾小球基底膜增厚和系膜细胞增殖的情况;(3)经ARP灌胃15 d后,小鼠空腹血糖值明显降低,小鼠体重减轻的情况得到改善;(4)糖尿病肾病小鼠肾脏组织中CAT的活性和GSH的含量明显降低,ARP(100,300 mg/kg)能有效提升糖尿病小鼠肾组织中CAT活性和GSH含量,提示,糖尿病肾病小鼠肾脏的氧化应激反应得到改善;(5)在糖尿病肾病小鼠肾组织内,p38 MAP Kinase信号通路被激活,p-MKK3/6和p-p38表达显著增加,其下游FN、TNF-α和MCP-1的表达量明显提升,MMPs的活性也显著升高。ARP(100,300 mg/kg)给药15 d后,能有效抑制糖尿病小鼠肾组织中p38 MAP Kinase信号通路的激活,降低其下游炎症因子TNF-α和MCP-1以及FN的表达水平,并有效抑制MMPs的活性,进而缓解糖尿病小鼠肾损伤中的炎症反应和纤维化的进程;(6)在糖尿病肾病小鼠肾组织内,ERK1/2信号通路被激活,其下游凋亡相关蛋白表达量也明显提升。与模型组相比,ARP(100,300 mg/kg)能抑制糖尿病小鼠肾脏组织中ERK1/2信号通路的激活,降低p-ERK1/2的表达水平,并能有效减少Bax、caspase-9和caspase-3的表达量,缓解肾脏细胞凋亡的进程。结论:(1)ARP(100,300 mg/kg)能有效降低糖尿病肾病小鼠的空腹血糖值,改善小鼠体重减少的情况,并能有效提高糖尿病肾病小鼠肾脏中抗氧化酶CAT的活性和GSH的含量,具有抗氧化作用。(2)ARP(100,300 mg/kg)能有效抑制糖尿病肾病小鼠肾小球的萎缩,系膜细胞的扩张,改善小鼠肾脏的结构异常。(3)ARP(100,300 mg/kg)能通过抑制糖尿病肾病小鼠肾脏中p38MAP Kinase信号通路的激活,从而抑制其下游炎症因子(TNF-α和MCP-1)和纤维化相关蛋白FN的表达及MMPs的活性,最终改善糖尿病肾病小鼠肾脏中的炎症反应和纤维化。(4)ARP(100,300 mg/kg)能通过抑制糖尿病肾病小鼠肾组织中ERK1/2信号通路的激活,进而抑制肾脏细胞凋亡相关蛋白(Bax、caspase-9和caspase-3)的表达,最终延缓糖尿病肾病小鼠肾脏细胞凋亡的进程。