蛋氨酸(Met)作为唯一含硫的骨架氨基酸,广泛运用于饲料、食品、医药及化妆品等领域。目前,Met的生产方法主要有化学法。本文主要以2-氨基-4-甲硫基丁腈为底物,采用生物催化生产Met。首先建立了 2-氨基-4-甲硫基丁腈、2-氨基-4-甲硫基丁酰胺及Met的液相色谱分析方法,然后采用富集培养和定向筛选技术,以底物2-氨基-4-甲硫基丁腈为唯一氮源,筛选得到八株具有催化2-氨基-4-甲硫基丁腈生产Met的野生菌株;通过形态特征、生理生化特征、16SrDNA序列、系统发育树分析,ZJB-12001被鉴定为Pseudomonas fluorescens;并已保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉),保藏号为CCTCCM2012449。以ZJB-12001为出发菌株,通过单因素和正交试验得到了该菌催化2-氨基-4-甲硫基丁基制备Met的最适培养基组成(g/L):甘油15.80、柠檬酸三钠14.70、酵母粉32、谷氨酸钠5、己内酰胺0.5、MgS04·7H200.15、KH2P04 0.75、K2HP04·3H20 0.75。在此基础上,对 ZJB-12001的培养条件进行了研究,发现菌种产酶和生长的最适初始pH为7.5,温度为28℃,接种量为4%,装液量为16%。在上述条件下,测定了该菌的发酵生长曲线,最佳产酶时间为48h,酶活力为152.30U/L,生物量7.43 gDCW/L,分别是优化前的5.59倍和2.09倍。菌株ZJB-12001静息细胞催化2-氨基-4-甲硫基丁腈制备Met的最适反应体系为pH 8.0的Tris-HCl缓冲溶液,最佳反应温度为45℃;菌体催化温度在25～45℃范围时,遵循Arrhenius方程,表观活化能Ea=21.88kJ/mol,且在 40、45 和 50℃ 的半衰期分别为 97.76、54.92和5.94 h;该菌催化反应不需要金属离子做为辅酶,且受底物和产物毒害作用大;静息细胞使用批次不理想,缓冲体系中重复使用第七次时,酶活力只有第一次使用时的11.46%。