CDK5RAP3在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖侵袭能力的影响

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lanbing510
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目的:通过研究胃癌组织及其相应的癌旁组织中CDK5RAP3蛋白的表达情况及差异,分析其表达水平与胃癌患者临床病理特征之间的相关性;初步探索低表达CDK5RAP3对胃癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响。方法:1.通过回顾性研究,收集2014年1月至2014年7月期间来自福建医科大学附属协和医院胃外科行胃癌根治性手术的108例患者的临床资料及新鲜胃癌组织、相应的癌旁组织,采用免疫印迹技术检测CDK5RAP3蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达情况;2.使用?2检验分析CDK5RAP3蛋白的表达水平与胃癌患者临床病理特征之间的关系。3.收集我院胃外科2009年10月至2010年09月期间手术切除并经病理证实的43例胃癌及癌旁组织的石蜡标本,采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(S-P法)检测CDK5RAP3蛋白的表达情况。4.应用RNA干扰技术下调胃癌MGC-803细胞CDK5RAP3蛋白的表达。5.采用CCK8法、平板克隆形成实验分析CDK5RAP3下调对胃癌MGC-803细胞增殖活力的影响。6.采用Transwell侵袭小室实验检测CDK5RAP3下调对胃癌MGC-803细胞侵袭能力的影响。结果:1.Western blot结果显示在108例标本中,73例标本CDK5RAP3的蛋白表达量在胃癌组织中低于癌旁组织,占67.59%,35例患者CDK5RAP3表达量在胃癌组织中高于癌旁组织,占32.41%。通过NIH Image J软件灰度分析计算出,CDK5RAP3蛋白相对表达强度在胃癌组织为(0.6010±0.06796),低于其在邻近癌旁组织中的表达(0.9809±0.1331),两组差异具有统计学意义(P<0.05)。2.CDK5RAP3蛋白的表达下调与患者的肿瘤浸润深度、TNM分期密切相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤大小、组织学分型、淋巴结转移无显著相关性(P>0.05)。3.通过免疫组化染色显示,在胃癌组织、癌旁组织中CDK5RAP3蛋白均有表达,其主要定位在细胞的胞浆中。CDK5RAP3蛋白在胃癌组织中的强阳性表达率为44.19%(19/43),相应的癌旁组织为79.07%(34/43),差异具有统计学意义(P<0.05)。4.经Western blot鉴定,胃癌MGC-803细胞转染CDK5RAP3干扰质粒后,与阴性对照组相比,CDK5RAP3的表达明显下调(P<0.05)。5.CCK8实验、平板克隆形成实验结果发现:下调CDK5RAP3的表达水平能够促进胃癌MGC-803细胞的增殖能力(P<0.01)。6.Transwell实验结果显示:下调胃癌MGC-803细胞中CDK5RAP3的表达能显著提高细胞的体外侵袭能力(P<0.01)。结论:CDK5RAP3在胃癌中的表达明显低于癌旁组织,CDK5RAP3的表达水平与肿瘤浸润深度、TNM分期显著相关;CDK5RAP3参与了胃癌细胞的增殖和迁移,下调CDK5RAP3能显著促进细胞的增殖和侵袭能力。
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