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原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC,简称肝癌)是一种全球性的高发恶性肿瘤。肝癌发病隐匿,大部分患者被确诊时已是晚期,失去了治疗良机。因此,迫切需要寻找更加敏感的诊断指标。最近有研究发现DLK1在肝癌组织中高表达,而在正常肝组织中不表达,故DLK1在肝癌中的作用引起了人们广泛的兴趣。本实验采用基因沉默的方法检测DLK1在肝癌、癌旁及正常肝组织中表达的变化,并探讨其在肝癌、癌旁肝硬化及正常肝组织凋亡过程中的作用。[目的]探讨RNA干扰沉默DLKl基因表达在正常肝细胞、癌周肝硬化肝细胞和肝癌细胞凋亡、增殖过程中的作用,为肝癌的早期诊断和治疗提供实验室依据。[方法]1、通过转染试剂Lipofectamine2000将DLK1siRNA转染入正常肝细胞株HL-7702、癌周肝硬化肝细胞株QSG-7701和肝癌细胞株QGY-7703这三种细胞中,并设立siRNA沉默组、阴性对照组和空白对照组。通过RT-PCR检测3组细胞中DLK1的表达水平并筛选出沉默效果最佳的阳性siRNA组。2、利用流式细胞技术检测3株细胞经DLK1siRNA转染后的凋亡情况及其细胞周期分布。3、利用MTT和细胞集落试验检测3株细胞经DLK1siRNA转染后的细胞增殖情况并绘制生长曲线。4、利用Western Blot检测3株细胞经过RNA干扰后DLK1蛋白表达的变化。[结果]1、通过RT-PCR证实siRNA能有效下调DKL1mRNA的表达,其中siRNA DLK1-homo-690的沉默效果最好。2、3株细胞经过RNA干扰后凋亡率均明显增加,肝癌细胞的凋亡率增加显著,细胞周期阻滞于S期；癌周肝硬化细胞的凋亡率次之,正常肝细胞凋亡不明显,癌周肝硬化细胞和正常肝细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期。3、3株细胞经过RNA干扰后增殖率明显降低,以癌周肝硬化细胞最为明显,肝癌细胞次之,而正常肝细胞的增值率变化不是很明显。4、3株细胞经过RNA干扰后DLK1蛋白表达较空白对照组和阴性对照组少。[结论]通过RNA干扰沉默DLK1基因可以促进肝癌细胞,癌周肝硬化肝细胞和正常肝细胞的凋亡,并抑制它们的增殖。