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背景:在泌尿外科临床工作中,尤其是肾脏移植手术广泛开展以来,应用输尿管-膀胱再植吻合术重建尿液通路系统,已经成为经常运用的操作技术。然而,膀胱解剖位置深,手术显露差,输尿管-膀胱的手法吻合操作复杂而耗时,术后漏尿和狭窄等并发症的发生率高,虽然通过采用输尿管内放置支架管的方法能较好的预防术后组织水肿和吻合口漏尿形成的输尿管狭窄,但它同时也带来了置管的并发症,增加了泌尿系感染机会,影响了输尿管的蠕动功能,另外术后DJ管长期留置,管壁易形成结石,取出困难,同时管体韧性减退,脆性增加,取出时易造成DJ管断裂,并且术后有可能发生DJ管回缩、移位,导致取出困难,甚至需要二次手术取出。再者,安放的输尿管支架管需要术后进行膀胱镜下取管操作,无形之中增加了侵袭性操作的机会和风险,同时亦给患者带来了不必要的身心痛苦及经济负担。上述问题困扰着临床医生,因此,人们日益期盼一种简便,快捷,安全,无支架的新方法来完成输尿管-膀胱再植吻合。目的:本项目拟应用钛轮钉吻合器行输尿管-膀胱粘膜机械吻合,并用钛夹关闭膀胱壁肌层建立抗反流隧道,以开辟尿路重建的新方式,评价及探讨钛轮钉吻合器行输尿管-膀胱粘膜机械吻合的安全性,可靠性,操作的难易程度和可行性,并与手工缝合法免双J管组及双J管置入组比较,评价其优势和劣势,探讨输尿管-膀胱机械吻合重建尿路的临床应用价值,为其能够应用于临床提供实验依据。方法:应用钛轮钉吻合器遵循Lich-Gregoir技术,通过膀胱外途径行输尿管-膀胱粘膜再植术,以常规手工缝合输尿管-膀胱粘膜免置DJ管组及放置DJ管组做为对照组,每组9例。比较术中膀胱-输尿管粘膜吻合时间、抗反流隧道建立时间、一次吻合成功率、吻合口漏尿情况等,分别在术后12周通过彩色多普勒超声、逆行膀胱造影、大剂量静脉肾盂造影、Whitaker test实验、大体标本观察及HE染色观察吻合口愈合情况、各组间、各部位间组织学变化、术侧肾脏功能情况、上尿路尿动力学变化,尿路通畅情况和并发症发生情况,利用Masson染色观察吻合口部位及上尿路胶原纤维的分布变化,通过免疫组织化学染色及Western Blot技术进行各组间胶原蛋白(ColⅠ、ColⅢ)半定量分析并利用图像分析软件测定其表达水平,利用扫描电子显微镜观察吻合口粘膜覆盖情况及有无结石、结晶形成,评估该吻合技术的可行性及安全性。结果:1、所有手术均顺利完成,Ⅰ组(钛轮钉机械吻合组)及Ⅱ、Ⅲ对照组中均没有发生术中死亡,吻合时间Ⅰ组明显少于Ⅱ、Ⅲ对照组(11.56±0.34 min versus18.11±1.06 min及22.78±0.49 min,P<0.01),手术过程中测量的各组间输尿管管径的平均值分别是Ⅰ组: 2.94±0.13mm (2.5-3.5mm之间);Ⅱ组:2.91±0.27mm(2.6-3.7mm之间);Ⅲ组: 3.12±0.17mm (2.5-3.6mm之间)。各组间输尿管管径相比无显著性差异。一次吻合成功率:钛轮钉组:88.9%;手工缝合免双J管组:100%;手工缝合置双J管组77.8%。2、Ⅰ组及Ⅱ组中均没有发生术后观察期间死亡,Ⅲ组中有1例犬因泌尿系感染于术后20天死亡,其膀胱内滞留的DJ管表面有结石形成,其余犬只正常存活且膀胱留取的尿液细菌培养结果均呈阴性。术后12周彩色多普勒超声、大剂量静脉肾盂造影、逆行膀胱造影、Whitaker试验及大体标本观察结果显示:Ⅰ组所有实验犬吻合部位的钉环及钛夹位置良好,未发生移位,造影剂通过吻合口顺畅,肾脏、膀胱、输尿管形态良好,无输尿管梗阻及膀胱-输尿管返流发生,吻合口愈合良好,肾脏功能正常,肾盂内压力测试均在正常范围内,输尿管蠕动功能良好;Ⅱ组中有1例犬出现不完全性输尿管梗阻,狭窄部位在输尿管-膀胱吻合处;Ⅲ组有1例犬发生膀胱-输尿管返流。26例存活犬术后排尿正常,未观察到肉眼血尿发生,无切口感染、裂开,无尿囊肿形成及尿漏发生。HE染色光镜下观察结果显示各组间的组织学改变相似,均有轻度的输尿管及肾间质局部出血水肿及炎性细胞浸润,各组肾小球病变轻微,少数肾小球可见轻度充血,观察钛轮钉机械吻合组吻合口粘膜平坦,覆盖完整,对合情况良好,Ⅱ组中有2例犬吻合口管腔内粘膜略有凹凸不平,其中1例管腔较狭窄,Ⅱ组中剩余7例犬及Ⅲ组中所有犬只的吻合口管腔内粘膜与机械吻合组观察情况相似。观察钛环及钛夹周围组织结构与Ⅱ、Ⅲ组吻合口管壁厚度、粘膜炎症程度、纤维及肉芽组织增生情况无明显差异存在。Masson染色图片经IPP6.0图像分析软件分析,结果显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间吻合口部位、上、下段输尿管、肾脏组织的胶原纤维的分布变化及平均光密度值无显著差异。应用免疫组化染色检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间的输尿管膀胱吻合口、上、下段输尿管及肾脏组织的Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅠ、ColⅢ)表达,经图像分析技术进行半定量分析的结果与Masson染色一致。扫描电子显微镜观察钛轮钉机械吻合形成的新输尿管开口粘膜覆盖完整,管腔通畅,无结石、结晶形成。利用Western Blot技术,测定各组间胶原蛋白(ColⅠ、ColⅢ)的表达水平,经Alphalmager 2200图像分析软件测定各杂交带积分光密度值(IDV),对比其结果,显示各组间、各相应部位间无显著差异。结论:应用钛轮钉机械吻合进行膀胱外途径的输尿管-膀胱再植术是安全可行的,该技术在保持输尿管开口畅通的情况下无需置放DJ管,且操作简便易行,缩短了手术所需时间,同时有可能会减少并发症的发生。