葡聚糖接枝型高载量金属螯合介质的制备及其性能研究

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固定化金属螯合层析是一种纯化蛋白的优良方法。该方法主要利用共价作用固定在微球表面的配基与金属离子螯合形成螯合物。蛋白质通过其表面的组氨酸、色氨酸等基团与金属离子形成螯合结构,利用配位作用达到纯化蛋白的目的。利用固定化金属螯合层析介质纯化带组氨酸标签的蛋白的技术,近年来备受关注。但金属螯合介质还存在载量低的问题,每毫升介质的动态载量大多在15-20毫克。葡聚糖分子具有链状结构,将其偶联于微球表面及内部,能够有效提高介质与蛋白的吸附位点,从而提高介质的吸附容量和工作效率。本研究系统考察了葡聚糖接枝对金属螯合介质性能的影响,制备了一种葡聚糖接枝型高载量、高性能金属螯合层析介质,并对其理化参数和应用性能了进行了评价,同时将其与商品介质进行了比较。具体研究工作如下:  1、以琼脂糖凝胶微球(Sepharose6FF)作为载体,采用烯丙基活化方法对琼脂糖微球进行活化,然后接枝葡聚糖分子,最后偶联亚氨基二乙酸和螯合金属离子,制备得到葡聚糖接枝型金属螯合介质;系统考察葡聚糖分子量对介质性能的影响。结果表明,随着葡聚糖分子量的增加,其接枝量也增加,且葡聚糖接枝对介质外观形貌无影响,制备的葡聚糖接枝型金属螯合介质对His-LDH的载量增加26.6%。  2、进一步采用部分接枝的方法制备葡聚糖接枝型金属螯合介质,即只在介质的外部接枝葡聚糖。考察了葡聚糖接枝厚度对介质性能的影响。将制备好的介质用于纯化组氨酸标签蛋白,结果表明,随着葡聚糖接枝厚度的增加,介质的动态载量先增加后减小,最高可达37 mg/mL胶,与商业化产品Ni Sepharose6FF介质进行比较,提高了1.5倍。  通过本研究,制备了葡聚糖接枝型高载量金属螯合介质,该介质具有载量高、稳定性高、流通性能好的优势,可用于组氨酸标签蛋白的高效纯化。
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