毕赤酵母(Pichia pastoris,P.pastoris)作为一种重要的真核表达系统,具有很多的优点,相比于大肠杆菌表达系统,它可高效、严格地调控外源蛋白的表达；对表达的蛋白能够进行翻译后的加工和修饰；相比于哺乳动物细胞表达系统,它又具有更利于高密度发酵培养,且营养要求低,生长快,培养基廉价,便于工业化生产等优点,因此,毕赤酵母表达系统作为一种在医药工业上较为广泛利用的基因表达体系。　　 但是此表达系统在实际应用中也存在一些缺点,其中之一是毕赤酵母发酵表达外源蛋白所用的时间长,这个过程中由于可能有甲醇的毒性和生长条件和环境的因素,使其生长活力下降,这一过程伴随有凋亡现象,而不利于外源蛋白的高效表达。为了解决这一问题,本论文以酵母产生凋亡的机制为切入点,分析酵母凋亡机制和凋亡基因,期望通过选择酵母抗凋亡蛋白Birlp的同源物Survivin对毕赤酵母进行分子重组与遗传改良,实现降低酵母正常生长的死亡率和凋亡率来提高毕赤酵母的生长密度和速率,为开发生长活力强、生长周期短,耐凋亡的毕赤酵母奠定基础,使该表达系统更好地应用于外源蛋白与酶高效生产。　　 本论文首先通过对酵母凋亡蛋白Birlp和人凋亡抑制蛋白Survivin进行生物信息学分析,发现虽然Birlp全基因长2870bp,Survivin仅有429bp,但是在功能上,二者却是同源类似物,并且均具有BIR一个与凋亡密切相关的成锌指结构。鉴于目前酵母凋亡基因Birlp的具体作用途径和部分作用机理尚未清楚,且片段较长基因操作相对困难,故本论文将Birlp的同源类似物Survivin的基因整合到毕赤酵母的基因组上,并通过诱导性表达和组成型表达两种分子重组方式,以实现对毕赤酵母生长与凋亡调控。　　 本文在对酵母凋亡蛋白Birlp和人凋亡抑制蛋白Survivin的结构与功能进行生物信息学分析与重组方式设计的基础上,将酵母抗凋亡蛋白Birlp的同源物survivin的基因和其突变体survivin(T34A)分别构建到组成型穿梭表达质粒pGAPZA和诱导型穿梭表达质粒pPICZA中,然后整合到酵母的基因组上,进行分析研究。通过建立生长曲线我们发现含有促生长的survivin基因的重组毕赤酵母X33的生长率和最终稳定期菌液OD值均比含有具有促细胞凋亡的survivin(T34A)基因的重组毕赤酵母X33的OD值要高,而对照组的检测值处于二者之间。在24小时、48小时、72小时取样利用MTT法测定酵母凋亡的抑制率发现抑制率呈上升趋势,且诱导性表达的抑制率比组成性的抑制率平均值高。对凋亡菌体的核酸电泳显示,会产生的一系列的规则DNA片段,其电泳谱呈现典型的“梯状带”。流式细胞仪分析结果证明两种重组毕赤酵母在生长率、死亡率和抑制率具有明显的差异。　　 结论是Survivin能够产生促进酵母细胞生长的效果,而其对照突变体可以促进细胞凋亡,达到抑制酵母细胞生长的效果,且诱导型的效果较组成型的效果要略微明显。即如果将基因survivin(T34A)整合到工程菌中,以期促进酵母的工业发展。