姜黄素逆转卵巢癌耐药的试验研究

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目的:通过观察姜黄素(curcumin)对人卵巢癌A2780/Taxol细胞作用,研究细胞耐药的原因及姜黄素逆转耐药的机制,为姜黄素逆转卵巢癌耐药应用于临床提供实验依据。方法:1.卵巢癌耐药细胞A2780/Taxol在体外培养,MTT比色法检测不同浓度的姜黄素对细胞增殖的影响。2. Western-blot方法检测姜黄素作用人卵巢癌A2780/Taxol细胞后,细胞内P-gP,PKC-α的表达情况。3.姜黄素、紫杉醇共同作用于卵巢癌耐药细胞A2780/Taxol,经PI(碘化丙啶)染色后,上流式细胞仪测定细胞凋亡情况。结果:1.紫杉醇与不同浓度姜黄素联合作用于卵巢癌耐药细胞A2780/Taxol,较对照组能明显抑制细胞生长(P<0.01);姜黄素浓度未达20μM时,伴随姜黄素浓度的递增,人卵巢癌A2780/Taxol细胞生长抑制呈上升趋势,差异具有统计学意义(P<0.01);姜黄素浓度达20μM后,姜黄素浓度对卵巢癌A2780/Taxol细胞的生长抑制率无明显影响(P>0.05)。2. western blot结果表明姜黄素干预的人卵巢癌A2780/Taxol细胞,Mdr-1/P-gP、PKC-α蛋白表达比对照组明显降低,随着姜黄素浓度的增加Mdr-1/P-gP、PKC-α蛋白的表达有明显下降趋势,当姜黄素浓度为增加到20μM时随着姜黄素浓度的增加Mdr-1/P-gP、PKC-α蛋白的表达不再下降。3.不同组细胞PI染色后,上流式细胞仪检测,结果发现姜黄素组细胞的凋亡率明显比空白对照组增加(P<0.05),姜黄素浓度未达20μM时,伴随姜黄素浓度的递增人卵巢癌A2780/Taxol细胞的凋亡率有上升趋势,差异具有统计学意义(P<0.01),姜黄素浓度达20μM后,姜黄素浓度对卵巢癌A2780/Taxol细胞的生长抑制率无明显关系,差异无统计学意义(P>0.05)。姜黄素20μM联合紫杉醇组凋亡率比单独使用紫杉醇组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:1、姜黄素能抑制人卵巢癌A2780/Taxol细胞的生长,具有抗肿瘤作用,姜黄素与紫杉醇联合作用较单独使用紫杉醇细胞抑制率明显增加,姜黄素能增加紫杉醇对人卵巢癌A2780/Taxol细胞的细胞毒性,降低细胞的耐药性。2、姜黄素能通过抑制人卵巢癌A2780/Taxol中Mdr-1基因表达,降低P-gP蛋白表达,阻碍P-gP蛋白生物泵功能,减少卵巢癌细胞对紫杉醇的泵除,增加细胞对紫杉醇敏感性。3、姜黄素可以降低人卵巢A2780/Taxol细胞中PKC-α蛋白的表达,降低P-gp的磷酸化速度,抑制P-gP蛋白生物学功能,逆转P-gP介导的卵巢癌耐药。
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