猪圆环病毒（PCV）属于圆环病毒科内圆环病毒属成员,它是一种小型、无包膜、无血凝活性、单链环状DNA病毒。PCV分为四种类型:猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪圆环病毒3型（PCV3）、猪圆环病毒4型（PCV4）。1974年最初在猪肾细胞系（PK-15）的污染物中发现了PCV1,其不具有致病性。与PCV1不同,PCV2可以引起各种临床症状,例如断奶仔猪多系统衰竭综合症（PMWS）、猪皮炎与肾病综合症（PDNS）、猪呼吸系统疾病综合症（PRDC）、仔猪先天震颤（CT）和猪繁殖障碍等,并常与其它病原共同感染造成机体免疫抑制,是全球公认的危害养猪业的重要免疫抑制病原。当前,世界上很多国家和地区的猪群仍深受PCV2的侵袭,感染率及发病率居高不下。河南是畜牧大省,其生猪养殖业在畜牧中占有重要地位,猪圆环病毒的持续感染严重制约着养猪业的健康发展。关于河南省PCV2的流行病学分析较少,本课题对2017～2021年河南省PCV2病原学,血清学进行分析,并对PCV2的Cap蛋白进行了原核表达,为之后ELISA抗体试剂盒的研究奠定基础。1.河南省猪圆环病毒2型病原学分析为了解河南地区2017～2020年猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）的分子流行病学和进化特征,共采集河南地区不同规模化猪场401份临床样本,进行PCR检测,并从阳性样本中扩增出全基因组,对序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示:401份临床样本中,PCV2阳性率39.90%（160/401）,其中2017～2020年阳性率分别为58.65%（61/104）,49.48%（48/97）,28.57%（36/126）,20.27%（15/74）。对24株阳性样本进行序列分析,所测毒株相似性介于95.90%～99.80%,与参考序列相似性为95.10%～99.80%。根据遗传进化分析,24个分离株分别处于2个分支,PCV2b（8/24）,PCV2d（16/24）,说明PCV2d逐渐取代了PCV2b成为河南地区新的优势基因型。本课题揭示了河南地区PCV2的流行情况,为河南地区PCV2疫苗株的选育和疫苗研发提供一定参考价值。2.河南省猪圆环病毒2型血清学分析为了解河南省规模化猪场PCV2抗体水平,收集了2019～2021年1677份猪血清样本,应用间接ELISA的方法进行血清学检测,检测结果显示:送检的1677份血清样品中,有1268份呈PCV2抗体阳性,平均抗体阳性率75.61%,超过国家农业农村部规定的最低70%免疫合格标准,说明河南地区猪群整体免疫效果较好。其中2019年抗体阳性率为83.20%（322/387）;2020年抗体阳性率为86.91%（459/526）;2021年抗体阳性率为63.74%（487/764）,抗体水平可能受猪价,新型肺炎冠状病毒、非洲猪瘟等宏观因素影响有所下降,应增加免疫次数或更换免疫效果更好的疫苗。血清样品按猪群类别分为母猪,保育猪,育肥猪,抗体阳性率分别为78.67%（332/422）,63.23%（375/593）,84.74%（561/662）,保育阶段为PCV2的高发阶段,需要改进免疫程序,及时补免,以确保保育猪PCV2抗体维持在有效的保护水平。本试验为河南省PCV2的免疫防控提供一定参考。3.猪圆环病毒2型Cap蛋白原核表达为了获取PCV2 Cap蛋白,通过设计Cap蛋白特异性引物,PCR进行扩增,将扩增的Cap基因克隆到p MD18-T载体中,经过基因工程进行双酶切后,克隆到原核表达p GEX-6P-1载体中,提取质粒并进行PCR扩增、通过双酶切及测序验证比对正确后,转化到BL21（DE3）大肠杆菌表达系统中,并对影响诱导表达的条件即温度、时间、IPTG浓度进行优化,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹法（Weste rn blotting）试验对表达的PCV2 Cap蛋白进行验证。验证结果显示PCV2 Cap蛋白原核表达质粒构建成功,在最优诱导表达条件下,即37℃、0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h后,SDS-PAGE电泳可在约48 KDa位置检测到所表达的目的蛋白。通过免疫印迹法转到PVDF膜,用猪血清为一抗,（兔抗猪）Ig G-HRP做二抗,对表达蛋白进行Western-blotting检测,结果显示目的蛋白可以特异性结合并显色。本试验为PCV2之后ELISA试剂盒的研究奠定了一定基础。