论文部分内容阅读
植物BELL家族基因能够调控植物生长和发育,如控制植物从营养生长向生殖生长的转变。因此,研究BELL家族基因在猕猴桃花发育过程中的潜在作用,能为后期利用分子生物学技术调控猕猴桃花发育提供参考。本研究进行了黄金猕猴桃花期物候观察、花发育阶段划分、总RNA提取、BELL家族基因的鉴定、筛选与克隆以及目的基因在黄金猕猴桃不同花发育阶段、幼叶和幼果中的表达分析等研究,获得如下结论:1、通过对参考方法进行改良后,获得一种适合黄金猕猴桃不同组织总RNA的提取方法。2、黄金猕猴桃雌株和雄株的年花期物候、花序和花朵数量、花序着生位置及花序发育存在差异;此外,将黄金猕猴桃花发育划分为11个时期,分别为:1:休眠芽期;2:芽膨大期;3:叶出现期;4:展叶期;5:现花蕾期;Ⅰ:紧花蕾期;Ⅱ:花萼开裂期;Ⅲ:50%可见花瓣期;Ⅳ:90%可见花瓣期;Ⅴ:花瓣展开期;Ⅵ:花绽放期。3、从猕猴桃全基因组数据库中鉴定得到9个BELL家族成员,包含22条序列;部分成员具有BELL家族所特有结构域,部分成员与调控花发育有关基因存在蛋白互作及共表达,且在不同组织间存在差异性表达。此外,该家族基因密码子偏性弱,且拟南芥较适合作为该家族基因外源表达受体。4、利用同源克隆法获得5个基因,分别命名为AcBLH6、AcBLH7、AcBLH8、AcBLH9和AcBLH11,并上传GenBank,登录号依次为MH667489、MH588307、MH667490、MH667491和MH667492。序列分析发现,AcBLH6编码区包含1947bp,编码648个氨基酸;AcBLH7编码区包含957bp,编码318个氨基酸;AcBLH8编码区包含2019bp,编码672个氨基酸;AcBLH9编码区包含1695bp,编码564个氨基酸;AcBLH11编码区包含1290bp的序列,编码429个氨基酸。进化分析发现,同科属之间亲缘关系较近,基因的同源性高;此外,AcBLH6、AcBLH8和AcBLH9均包含BELL家族特有结构域,而AcBLH7缺失部分BELL结构域,AcBLH11缺失VSLTLGL和未知结构域。5、表达分析发现,AcBLH6基因在幼叶中的表达量最高;AcBLH7基因在花发育11个时期的表达量最高;AcBLH8基因和AcBLH9基因在花发育前9个时期的表达量最高;AcBLH11基因在花发育前9个时期和幼叶中的表达量最高。