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本研究以实验室保藏的一株酸性纤维素内切葡聚糖酶(endo-1，4-β-D—glucanase，EG)产生菌绿色木霉(Trichodermaviride)WL0512(酶活性2411.1U/g干曲)作为原始出发菌株，通过自然分离筛选出一株产酶较稳定的TVN-13(酶活性2565.0U/g干曲)作为诱变出发菌株，将TWN-13菌株用真空微波和甲基磺酸乙酯(EthylMethane—sulfonate，EMS)逐级诱变处理，获得了一株高产、稳产内切葡聚糖酶的突变株E6—6。该菌株产内切葡聚糖酶活性达4659.1U/g干曲，是原始出发菌株WL0512酶活性的1.93倍。通过对固态发酵培养基的初步优化，使突变株的产酶能力提高了14.1％，达到5316.3U/g干曲。对E6—6所产内切葡聚糖酶进行最适反应pH和pH稳定性实验，结果显示其为酸性酶。
根据GenBank报道的来源于木霉属的内切葡聚糖酶II基因序列的保守区域设计引物，采用RT—PCR方法扩增得到绿色木霉突变株E6—6和出发菌株TVN-13的内切葡聚糖酶成熟肽基因egII和egII’的cDNA序列，分别构建重组质粒pTG19—T—egII和pTG19—T—egII’，测序发现两序列同源性为100％。egII全长1194bp，编码397个氨基酸，理论分子量为42.2kDa。利用Blast软件进行同源性分析，发现egII的氨基酸序列同编码木霉属内切葡聚糖酶的氨基酸序列同源性最高达到94％，将该基因序列提交GenBank数据库(登录号EF602036)。
将内切葡聚糖酶egII基因序列插入大肠杆菌(Escherichiacoli)表达载体pET-28aq(+)的NcoI和HindIII酶切位点之间，得到重组质粒pET-28a(+)—egII，将该质粒分别转入大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析显示，重组菌BL21(DE3)/egII胞内胞外均未无明显特异性蛋白条带；Rosettaq(DE3)/egII胞内出现分子量约为42kDa特异性蛋白条带，且随着诱导时间的延长蛋白表达量增大，但很难检测到内切葡聚糖酶活性。
将内切葡聚糖酶egII基因序列插入毕赤酵母(Pichiapastoris)穿梭质粒pPIC9K的EcoRI和NotI酶切位点之间，得到重组质粒pPIC9K—egII。将该质粒经NcoI线性化后电击转化入毕赤酵母GS115中。经甲醇诱导，内切葡聚糖酶在重组毕赤酵母中实现了分泌表达，摇床水平上培养96h酶活性达到15.48U/mL；胞内表达酶活性约为胞外的十分之一。SDS-PAGE分析显示，胞外目的蛋白分子量为48kDa左右，胞内目的蛋白分子量则为42kDa左右。酶学性质分析表明：该酶作用的最适pH为4.5；pH3.5—6.0范围内50℃保温1h，酶活性仍保留在80％以上；最适作用温度为50℃；55℃以下酶的稳定性较好。