子痫前期(Preeclampsia，PE)是妊娠期的特发性疾病，也是导致孕产妇和新生儿死亡的常见原因。子痫前期的病因尚未阐明，胎盘一直被认为在子痫前期的发病中起关键的作用，因为一旦胎盘离开母体后，子痫前期的症状很快消失。母体内皮功能损伤是PE患者的重要特征，而由胎盘分泌产生的多种促血管新生因子和抗血管新生因子失衡是导致母体内皮功能损伤的关键因素。子痫前期产妇血清中促血管新生因子VEGF含量低于正常产妇、而抗血管新生因子sFlt-1含量高于正常产妇。但是，关于胎盘中促血管新生因子和抗血管新生因子生成的调控机制尚未阐明。硫化氢(H2S)是近些年来发现的第三类气体信号分子，在体内CBS、CSE、3-MST三种酶催化L-半胱氨酸代谢的过程能够产生H2S。已有研究显示，子痫前期产妇胎盘组织中CBS和CSE两种酶的表达量显著低于正常妊娠胎盘组织，这也提示胎盘中CBS和CSE表达降低、H2S生成减少可能通过调节促血管新生因子和抗血管新生因子的生成来参与子痫前期的发生。在博士课题的第一部分内容中，我们以离体培养的足月胎盘组织块和足月胎盘滋养层细胞为研究对象，分析了H2S对胎盘促血管新生因子VEGFA和抗血管新生因子sFlt-1的调节作用及其机制。　　糖皮质激素(GCs)在妊娠过程中发挥了重要的调节作用，胎盘是糖皮质激素重要的靶器官。妊娠期适宜浓度的糖皮质激素不仅能够促进胎儿器官的分化和成熟，还能够参与胎盘中多种激素、细胞因子分泌的调控;但是，接触过高浓度的糖皮质激素会导致IUGR、PTB等妊娠并发症的发生。胎盘中的11β-HSD2被视作避免胎儿接触母体血液中高浓度皮质醇的保护屏障，能够催化有活性的皮质醇转化为无活性的脱氢皮质醇。近年来有研究显示，胎盘中11β-HSD2表达不足以及糖皮质激素蓄积与PE的发生有关。滋养层细胞侵入能力减弱、螺旋动脉重构障碍是PE产妇重要的病理特征，会在此基础上导致胎盘血液灌注不足、滋养层细胞缺氧以及抗血管新生因子大量产生、母体内皮功能损伤。人工合成的糖皮质激素地塞米松能够影响滋养层细胞的侵入过程，而母体血液中过高浓度的皮质醇会造成内皮功能损伤。由此我们推测，胎盘中11β-HSD2表达不足、皮质醇蓄积可能影响滋养层细胞的侵入以及抗血管新生因子的生成，进而造成子痫前期的发生。在博士课题的第二部分，我们在离体水平用足月胎盘组织块、足月胎盘滋养层细胞以及早期胎盘滋养层细胞作为研究对象，分析了11β-HSD2在胎盘抗血管新生因子生成以及滋养层细胞侵入调节中的作用;在体水平用妊娠SD大鼠作为研究对象，分析了抑制11β-HSD2是否能够模拟子痫前期的病理过程。　　主要实验结果如下:　　一、H2S对胎盘促血管新生因子和抗血管新生因子的调节作用及其机制　　1、正常胎盘组织和子痫前期胎盘组织中CBS、CSE、3-MST的表达量及其与促血管新生因子和抗血管新生因子的关系　　(1) PE胎盘组织中CBS、CSE的表达量低于正常胎盘组织，3-MST的表达量与正常胎盘组织无差异;(2)PE胎盘组织中促血管新生因子VEGF、VEGFA的蛋白含量低于正常胎盘组织，抗血管新生因子sFlt-1的mRNA含量低于正常胎盘组织;(3)VEGF、VEGFA的蛋白含量与CBS和CSE的蛋白水平呈正相关，sFlt-1的mRNA含量与CBS和CSE蛋白水平呈负相关。　　2、H2S对胎盘促血管新生因子和抗血管新生因子生成的调节作用　　(1)在离体培养的足月胎盘组织块中，NaHS和L-半胱氨酸处理能够增加VEGFA的mRNA含量和蛋白含量，降低sFlt-1的mRNA含量和蛋白含量;(2)在离体培养的足月胎盘滋养层细胞中，NaHS和L-半胱氨酸处理能够增加VEGFA的mRNA含量和蛋白含量，降低sFlt-1的mRNA含量和蛋白含量;(3)敲低CBS和CSE的表达后，L-半胱氨酸增加VEGFA、降低sFlt-生成的作用被逆转。　　3、NaHS和L-半胱氨酸处理过的滋养层细胞上清液对HUVECs增殖、迁移和管型结果形成的影响　　NaHS和L-半胱氨酸处理过的滋养层细胞上清液能够促进HUVECs的增殖、迁移过程，并诱导管型结构形成。　　4、H2S调节胎盘VEGFA和sFlt-1生成的分子机制　　(1) ATP敏感钾离子通道、PI3K、ERK以及P38的抑制剂均不能逆转NaHS和L-半胱氨酸调节胎盘滋养层细胞VEGFA和sFlt-1的效应;(2) NaHS和L-半胱氨酸处理能够增加胎盘滋养层细胞VEGFA mRNA的稳定性、降低sFlt-1 mRNA的稳定性;(3) NaHS和L-半胱氨酸处理能够增加胎盘滋养层细胞miR-133b表达，抑制miR-200c、-20a以及-20b的表达;(4) miR-133b的模拟物能够降低sFlt-1的mRNA水平和蛋白水平;miR-200c的模拟物能够降低VEGFA的mRNA水平和蛋白水平，而miR-20a、-20b的模拟物和抑制物仅能调节VEGFA的蛋白水平、不影响VEGFA的mRNA含量;(5)miR-133b和miR-200c模拟物分别能够抑制包含sFlt-1和VEGFA3UTR的荧光素酶报告基因的表达。　　二、11β-HSD2与子痫前期发病的关系及其在胎盘抗血管新生因子生成、滋养层细胞侵入中的作用　　1、正常胎盘组织和PE胎盘组织中11β-HSD的表达量　　PE胎盘组织中11β-HSD2的表达量低于正常胎盘组织，11β-HSD1的表达量与正常胎盘组织无差异。　　2、11β-HSD2在足月胎盘组织抗血管新生因子sFlt-1、sEng生成中的作用　　(1)在离体培养的足月胎盘组织块中，地塞米松以及11β-HSD2抑制剂联合皮质醇处理能够增加sFlt-1和sEng的生成;(2)在离体培养的足月胎盘滋养层细胞中，地塞米松以及11β-HSD2抑制剂联合皮质醇处理能够增加sFlt-1和sEng的生成;　　3、11β-HSD2在早期胎盘滋养层细胞侵入及抗血管新生因子sFlt-1、sEng生成中的作用　　(1)在离体培养的早期胎盘滋养层细胞中，地塞米松以及11β-HSD2抑制剂联合皮质醇处理能够增加sFlt-1的生成，但不影响sEng的生成;(2)地塞米松处理能够抑制早期胎盘滋养层细胞的迁移;(3)地塞米松以及11β-HSD2抑制剂能够抑制早期胎盘滋养层细胞的侵袭。　　4、抑制11β-HSD2能够诱导SD妊娠大鼠出现子痫前期的病理改变　　(1)在妊娠SD大鼠中，CBX组的颈动脉平均动脉压显著高于NaCl组;未孕SD大鼠中，CBX组和NaCl组的颈动脉平均动脉压无差异;(2)在妊娠SD大鼠中，CBX组的血清sFlt-1、sEng含量显著高于NaCl组;未孕SD大鼠中，CBX组和NaCl组的血清sFlt-1、sEng含量无差异;(3)在妊娠SD大鼠中，CBX组侵入子宫肌和螺旋动脉的滋养层细胞数目多于NaCl组;(4)在妊娠SD大鼠中，CBX组的肾小球评分显著高于NaCl组;未孕SD大鼠中，CBX组和NaCl组的肾小球评分无差异。　　结论:　　(1)H2S能够通过miRNAs调节促血管新生因子VEGFA和抗血管新生因子sFlt-1的生成;胎盘中CBS和CSE表达降低、H2S生成减少会导致sFlt-1生成增多、VEGFA生成减少，进而造成子痫前期的发生;(2)11β-HSD2参与胎盘抗血管新生因子sFlt-1、sEng的生成以及滋养层细胞的侵入;降低11β-HSD2的表达或活性能够诱导妊娠SD大鼠出现子痫前期的病理特征。