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含氟吸入麻醉剂的毒性研究主要集中在肝脏损害、肾脏损害和心血管抑制方面,由于其用药的特殊性,生殖毒性的研究仅限于动物实验和由于职业原因长期接触吸入麻醉药的医务人员,该类研究表明含氟吸入麻醉剂不但在细胞水平上能够影响细胞的分化,还在分子水平上破坏染色体DNA的结构。由于手术原因短时间接触吸入麻醉药对患者生殖功能影响的研究还很缺乏。
目的:观察吸入麻醉剂在体外对人精子运动功能的影响。
材料与方法:
实验试剂与仪器:
异氟醚为英国雅培制药有限公司产品,七氟醚为江苏恒瑞医药股份有限公司产品,计算机辅助的精液分析仪(comptlter assisted sperm analysis,CASA)为杭州麦迪公司产品。精子培养液HTF液购于美国Iravin公司。
精子悬液制备:
从本院男科门诊就诊的男性中筛选20份精子活力正常的精液标本,标本提供者年龄22~35岁,无心、肝、肾疾病,禁欲3~5 d,取样前48 h禁酒和咖啡等对精子有影响的食物或药物,手淫取精,精液液化后经上游法优化,然后用HTF培养液调节精子密度至(40~80)×106/ml。
实验方法及分组:
将20份精液标本随机分为异氟醚实验组和七氟醚实验组,每组10份。准备25只培养皿(直径8.5cm),取一份制备好的精子悬液,用微量移液器分别量取100μl放入每只培养皿,共取25份,将这25份精液随机分为5组(A、B、C、D、E),每组5份,分别给予空气(作为对照)和5、10、15、20μl异(七)氟醚于25℃室温下静置。
在用精液分析仪分别对A、B两组(每组5份)的运动参数分析结束后,每只培养皿均敞开盖子5 min使麻醉剂挥发完全,以达到撤药目的,然后继续保持密闭状态,1 h后再用精液分析仪重复测量上述运动参数。
随机选择配制好的正常精子悬液,依然用微量移液器量取100μl放入培养皿,不断加大异氟醚用量,直至找到一个精子全部死亡的浓度(用药时间为30min,每个用药浓度下的标本份数为5份),多次重复确认,并参照异氟醚浓度选择相近的七氟醚浓度继续观察七氟醚作用下精子运动参数的变化。
统计学分析:
采用SPSS11.0统计软件进行单因素方差分析,P<0.05为差异有显著性。
结果:1.4%~5.6%异氟醚作用于精子0.5~4 h后,精子活动率及活力显著升高。停用异氟醚后精子活动率及活力恢复至对照组水平。5.6%~42%异氟醚不引起精子活动率和活力的变化。42%~84%异氟醚可引起精子活动率和活力呈剂量依赖性下降0。1.3%~84.5%七氟醚对精子活力无影响。
结论:临床浓度异氟醚在体外作用于人精子,可以显著升高精子活动率和活力,并且作用可逆,随着浓度超过42%以上,精子活力和活动率逐渐下降。七氟醚对精子活力没有显著影响。