论文部分内容阅读
[目的]急性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病与支气管哮喘是常见的呼吸系统疾病,这些疾病常表现为咳嗽、痰多、喘息等症状。HR是一个复方制剂,临床应用证明它是一个很有效的镇咳祛痰药物,药效学研究提示它有很强的镇咳作用,但它是否有祛痰作用及其作用机制尚不清楚,本文重点研究它在祛痰方面的作用及其机制。[方法]1.首先采用常规的简易祛痰模型小鼠气道酚红排泄试验,评价HR是否具有祛痰作用。2.建立内毒素脂多糖(LPS)诱导诱导的小鼠急性气管炎模型：模型建立后,①气道内滴入碳墨,评价HR对模型小鼠气道碳墨的清除能力；②采用咔唑比色法测定灌洗液中的黏多糖,评价HR能否减少模型小鼠气道黏液黏多糖含量；③采用real-time PCR法测定肺组织中MUC5AC mRNA的表达和ELISA法检测灌洗液中的MUC5AC的蛋白含量,观察HR对黏蛋白MUC5AC mRNA表达与蛋白水平的影响。3.建立卵白蛋白(OVA)诱导的小鼠哮喘模型：模型建立后,①取肺进行病理切片,PAS染色,观察HR对黏液分泌细胞气道杯状细胞增生的影响；②采用real-time PCR法测定肺组织中MUC5AC mRNA的表达,观察HR对黏蛋白MUC5AC mRNA表达的影响。4.建立吸烟诱导的小鼠急性气管炎模型：①气道内滴入碳墨,评价HR对模型小鼠气道碳墨的清除能力；②采用咔唑比色法测定灌洗液中的黏多糖,评价HR能否减少模型小鼠气道黏液黏多糖含量；③采用-eal-time PCR法测定肺组织中MUC5AC mRNA的表达和ELISA法检测灌洗液中的MUC5AC的蛋白含量,观察HR对黏蛋白MUC5AC mRNA表达与蛋白水平的影响；④采用SABC免疫组化法检测肺组织MMP-9和p-p38的蛋白分子的表达,探索HR祛痰作用的分子机制。[结果]1.HR促进小鼠气道酚红排泄：小鼠每天灌胃给药HR1次,连续4天,300、600mg/kg组能增强气道酚红的排泄量。阳性对照药氯化铵1g/kg组也能明显增强气道酚红的排泄量。2.HR增强内毒素脂多糖诱导的小鼠急性气管炎模型气道黏膜纤毛清除作用：小鼠每天灌胃给药HR1次,连续4天,30、100、300、600mg/kg呈剂量依赖增强小鼠气道纤毛清除能力,与模型组比较,在HR300、600mg/kg时具有显著性差异；阳性对照药厄多斯坦300mg/kg也能明显增强小鼠气道纤毛的清除能力。3.HR抑制内毒素脂多糖诱导的小鼠急性气管炎模型气道黏液黏多糖分泌、MUC5AC mRNA与蛋白表达：小鼠每天灌胃给药HR1次,连续4天,10、30、100、300mg/kg组呈剂量依赖性降低BALF中的黏液黏多糖以及MUC5AC的蛋白含量；real time-PCR法测定显示,给药组小鼠肺组织中MUC5AC mRNA的表达也呈剂量依赖性降低,此结果与BALF中MUC5AC蛋白含量测定的结果一致。4.HR减少OVA致敏的小鼠哮喘模型气道杯状细胞的增生和抑制肺组织MUC5AC mRNA的表达：小鼠每天灌胃给药HR1次,连续11天,PAS染色结果显示,HR10、30和100mg/kg呈剂量依赖性抑制肺组织中杯状细胞的增生,HR100mg/kg的作用强度与Dex0.5mg/kg相似；定量PCR显示,HR10、30、100mg/kg组肺组织MUC5AC mRNA表达明显降低,Dex0.5mg/kg组也能明显降低肺组织MUC5AC mRNA表达。5.HR增强吸烟诱导的小鼠急性气管炎模型气道黏膜纤毛的清除能力：小鼠每天灌胃给药HR1次,连续6天,100、300和600mg/kg呈剂量依赖性增强小鼠气道纤毛清除能力,且具有显著性差异。阳性对照药厄多斯坦300mg/kg也能明显增强纤毛清除能力,其作用强度与HR300mg/kg类似。6.HR减少吸烟诱导的小鼠急性气管炎模型气道黏液黏多糖含量和抑制MUC5AC mRNA表达：小鼠每天灌胃给药HR1次,连续6天,10、30和100mg/kg组BALF中黏液黏多糖含量呈剂量依赖性下降。HR10、30和100mg/kg组BALF中MUC5AC蛋白含量明显降低,这与肺组织中MUC5AC mRNA的表达一致。7.HR抑制吸烟诱导的小鼠急性气管炎模型肺组织MMP-9与p-p38的表达,提示HR可能通过p38MAPK/MMP-9的信号通路调节MUC5AC的表达。[结论]我们的结果提示,HR能增强气道纤毛清除作用,降低肺组织中MUC5AC mRNA与蛋白的表达,降低黏液黏蛋白含量,其作用机制可能是通过p38MAPK/MMP-9的信号通路调节MUC5AC的表达,从而减少痰液的分泌。