皮肤作为人体最外部的器官，极易受到创伤。若对创口不处理，待伤口自行恢复，则容易造成感染或瘢痕增生等不良后果。创伤愈合过程主要依靠创面的成纤维细胞合成、分泌胶原蛋白和基质，与新生毛细血管共同组成肉芽组织，从而对伤口进行填充。创面愈合的标志之一是胶原蛋白的沉积，因此，增加创面胶原蛋白的产生和沉积是促进创伤愈合的一种手段。
　　重组人源Ⅲ型胶原蛋白(recombinanthumancollagenⅢ，Rhc-Ⅲ)是利用基因工程技术以人胶原Ⅲ型原始基因序列经过优化重组表达得到的，与人体天然胶原氨基酸序列高度一致。将Rhc-Ⅲ用于创伤愈合，一方面Rhc-Ⅲ具有丰富的亲水基团，可以增加成纤维细胞的粘附和增殖，另一方面可以直接补充创面的Ⅲ型胶原蛋白，降低瘢痕的发生几率。但是水溶性的Rhc-Ⅲ难以穿透角质层细胞间的脂质结构，且作用时间短，因此，需要依靠载体的帮助穿透角质层，延长其作用时间，从而达到与其治疗的效果。
　　脂质体(Liposomes，Lips)是将药物包封于类脂质的双分子层内而形成的微型泡囊体，Lips中的磷脂结构与人体的皮肤脂质有着高度的相似性，具有生物相容性高，生物降解性好，能够促进药物的透皮吸收等优点。Lips通过作用于角质层细胞间的脂质结构来促进药物透过角质层，并且能够在真皮中形成药物储库而缓慢的释放药物。将Lips混合于凝胶剂中，能够长时间滞留于创面，达到促进药物透皮和增加皮肤粘附性的双重目的。
　　基于此，本课题的设计思路是:第一步，筛选凝胶基质，采用所选择的凝胶基质制备凝胶剂(Rhc-Ⅲgels);第二步，首先以蛋黄卵磷脂和胆固醇为脂质膜材，采用薄膜分散法制备Rhc-Ⅲ脂质体(Rhc-Ⅲ-Lips)，然后，采用所选择的凝胶基质制备Rhc-Ⅲ脂质体凝胶剂(Rhc-Ⅲ-Lipsgels);第三步，对所制备的Rhc-Ⅲgels和Rhc-Ⅲ-Lipsgels进行质量评价，同时对其体外释药性及经皮渗透性进行研究;第四步，通过对动物皮肤安全性和大鼠皮肤的药效学实验来验证Rhc-Ⅲ-Lipsgels对创伤愈合治疗的优势，为临床提供更好的思路和理论依据。主要研究内容及结果如下:
　　1.Rhc-Ⅲgels的制备及质量评价
　　采用BCA法测定Rhc-Ⅲgels中总胶原蛋白的含量，方法学考察结果显示该方法符合测定要求。以外观性状、均匀度、黏度、pH和涂展性等为评价指标，通过单因素试验优化Rhc-Ⅲgels的最佳处方和制备工艺;通过三批重现性实验考察处方和工艺的可行性及稳定性;同时对其质量进行评价。结果表明，Rhc-Ⅲgels最优处方及工艺重现性良好，所制备的Rhc-Ⅲgels外观呈无色透明的半固体，易涂展，总胶原蛋白的含量为(1.51±0.06)mg/g，标示百分含量为(99.20±3.97)％，动力学黏度为(135.28±7.25)Pa·s，pH为(5.98±0.02)。初步稳定性试验结果表明Rhc-Ⅲgels不耐高温，在高湿、强光照射和高速离心条件下均能保持稳定，建议储存在阴凉处。
　　2.Rhc-Ⅲ-Lipsgels的制备及质量评价
　　首先，选择使用透析法测定Rhc-Ⅲ-Lips的包封率和载药量及体外释药性，并对其方法进行了考察;然后，采用薄膜分散法制备Rhc-Ⅲ-Lips，以粒径、包封率和载药量为评价指标，通过单因素试验筛选最优处方及工艺，并对Rhc-Ⅲ-Lips的理化性质进行表征;最后，采用直接混合法制备Rhc-Ⅲ-Lipsgels，并进行质量评价和初步稳定性考察。
　　结果表明，透析法能够将脂质体和游离胶原蛋白分开，方法学考察结果满足包封率、载药量及体外释放度测定的要求。最佳处方和工艺制备的Rhc-Ⅲ-Lips外观为乳白色的混悬液，微观状态显示呈类球形，粒子大小均匀，平均粒径为(261.2±12.4)nm，zeta电位为(-8.28±0.25)mv，包封率为(84.18±2.46)％，载药量为(6.31±0.15)％，pH值为(6.27±0.05)，体外释放结果显示，Rhc-Ⅲsol在24h累积释放百分率达到(77.68±1.03)％，而Rhc-Ⅲ-Lips24h释放(65.86±6.38)％，并且在24h之后，仍在缓慢释药，48h累积释放百分率达(75.13±1.53)％。Rhc-Ⅲsol和Rhc-Ⅲ-Lips的体外释放过程均符合Weibull方程。
　　直接混合法制备的Rhc-Ⅲ-Lipsgels外观呈乳白色半固体，动力学黏度为(124.70±2.61)Pa·s，pH为(6.27±0.02);初步稳定性试验结果显示，Rhc-Ⅲ-Lipsgels在高湿、强光照射和高速离心条件下均能保持稳定，鉴于Rhc-Ⅲ不耐高温，因此建议储存在阴凉处。
　　3.Rhc-Ⅲ-Lipsgels的体外释药性和经皮渗透性实验研究
　　采用扩散池法，以pH7.4的PBS作为释放介质，对Rhc-Ⅲgels和Rhc-Ⅲ-Lipsgels进行体外释放特性试验，在预定时间点取样并检测总胶原蛋白的含量，计算累积释放百分率(Q)并绘制Q-t曲线。然后通过数学模型，对两种制剂体外释放情况进行拟合。结果显示Rhc-Ⅲgels和Rhc-Ⅲ-Lipsgels24h的累积释放百分率分别达(73.47±1.74)％、(60.80±1.69)％，Rhc-Ⅲ-Lipsgels48h的累积释放百分率达(71.40±1.61)％，说明Rhc-Ⅲ-Lips具有一定的缓释作用，Rhc-Ⅲgels和Rhc-Ⅲ-Lipsgels的体外释放过程均符合Weibull方程。
　　采用扩散池法，以pH7.4的PBS作为接收液，对Rhc-Ⅲgels和Rhc-Ⅲ-Lipsgels进行体外经皮渗透实验，在预设时间取样并检测总胶原蛋白的含量，计算单位面积累积透皮量，并绘制透皮曲线进而探究其体外经皮渗透特征。结果显示，在完整皮肤中，Rhc-Ⅲgels和Rhc-Ⅲ-Lipsgels24h单位面积累积透皮量分别为(103.70±15.40)μg/cm2和(134.70±8.21)μg/cm2,Rhc-Ⅲ-Lipsgels是Rhc-Ⅲgels的1.30倍;在破损皮肤中，Rhc-Ⅲgels和Rhc-Ⅲ-Lipsgels24h单位面积累积透皮量分别为(135.32±12.84)μg/cm2和(156.21±13.14)μg/cm2，Rhc-Ⅲ-Lipsgels是Rhc-Ⅲgels的1.15倍，说明将Rhc-Ⅲ制成脂质体之后，可以增加其透皮量。
　　4.Rhc-Ⅲ-Lipsgels对动物皮肤安全性及药效学研究
　　通过对家兔的皮肤刺激性实验和豚鼠皮肤的过敏性试验考察Rhc-Ⅲ-Lipsgels的皮肤安全性，结果显示，Rhc-Ⅲ-Lipsgels无皮肤刺激性和过敏性，说明该制剂安全，可用于有破损的皮肤修复。
　　首先，在大鼠背部脊柱两侧对称处制作2个直径为1.0cm的圆形全层皮肤缺损创面制备急性创伤模型;然后，将大鼠分组并给药，A组为正常对照组(不造模)，将造模大鼠分为B、C、D、E四个组，B组为空白凝胶基质组(Blank gels)、C组为空白脂质体凝胶基质组(Blank Lips gels)、D组为Rhc-Ⅲgels组、E组为Rhc-Ⅲ-Lipsgels组，分别于大鼠背部的左侧伤口涂抹给药，右侧伤口不做任何处理作为模型对照组;最后对创面进行外观观察，拍照记录并计算创面愈合率，记录大鼠体重，于3天、7天和12天处死大鼠，取伤口皮肤组织进行HE染色、MASSON染色和天狼星红染色，在普通光学显微镜和偏光显微镜下观察其病理学特征。
　　实验结果显示，造模后，各组创面形状均匀、大小和深度一致，说明此造模方法可靠;与造模前相比，实验结束时的各组大鼠体重均有所提高，在一定程度上可说明该制剂无急性毒性;在3、7和12天，E组的创面愈合率均大于其他各实验组;HE染色结果显示，E组的肉芽组织出现的早，成熟的快，12天就可表皮化完全;MASSON染色结果显示，E组中胶原纤维沉积量多，创面愈合良好;天狼星红染色结果显示，在创面愈合的过程中，E组的Ⅰ型/Ⅲ型胶原纤维比例低于其他各组，创口皮肤组织中的Ⅲ型胶原含量多，在创面完全愈合时，Ⅰ型/Ⅲ型胶原纤维的比例更接近正常皮肤，说明将Rhc-Ⅲ-Lipsgels应用于创面中，具有降低病理性瘢痕发生几率的作用。
　　综上，本课题成功制备了Rhc-Ⅲ-Lipsgels，与Rhc-Ⅲgels比较，体外释放具有明显的缓释作用，体外经皮渗透量明显增加;无皮肤刺激性和过敏性，安全性良好;Rhc-Ⅲ-Lipsgels应用于创面中，愈合率增加，胶原纤维沉积量增加，Ⅲ型胶原含量多，在创面完全愈合时，Ⅰ型/Ⅲ型胶原纤维的比例更接近正常皮肤，说明将Rhc-Ⅲ-Lipsgels应用于创面中，具有降低病理性瘢痕发生几率的作用。