目的：探讨基于反相高效液相色谱法检测的尿核苷在原发性胆囊癌诊断中的临床意义。　　方法：首先建立高效率的流动相梯度淋洗程序，使10种核苷标准品和内标有很好的分离度；对反相高效液相色谱法进行包括线性相关性、回收率、准确度和精确度等方法学考察，并以此得到10种核苷标准品的标准曲线，验证反相高效液相色谱法检测尿核苷的可靠性和可行性；分别对采集的28例原发性胆囊癌患者，62例胆囊炎和胆囊息肉患者和70例正常人的尿液样本进行预处理后，用苯基硼酸凝胶色谱法提取尿中核苷，最后进行检测，获得3组尿液标本的典型色谱图；利用标准曲线计算3组尿液样本中的10种核苷水平，并对其差异进行比较明确是否有统计学意义；以样本中核苷含量作为参量，利用主成分分析法区分原发性胆囊癌组和良性胆囊疾病组及正常对照组，并对其敏感性及特异性与传统肿瘤标记物糖链抗原19-9、糖链抗原125和癌胚抗原相比较，探讨高效液相色谱法诊断原发性胆囊癌的优越性，尿核苷与原发性胆囊癌的临床关系。　　结果：通过不断对实验条件的优化，建立流动相梯度淋洗程序只需要30min，且分离效率和分离度均较高；方法学验证结果显示10种核苷的线性相关性良好（r>0.99），回收率介于87.39％～121.48%范围，准确率介于87.67%～121.33%范围，精确度RSD介于1.5%～10.5%范围；原发性胆囊癌组10种核苷中除了C和A外，其余的8种核苷水平显著高于良性胆囊疾病组和正常对照组（P<0.01）；通过主成分分析法，89.3%（25/28）的原发性胆囊癌患者被正确识别，敏感性与传统肿瘤标记物糖链抗原19-9（60.7%）、糖链抗原125（67.9%）及癌胚抗原（42.86%）相比，差异具有统计学意义（P<0.01）。　　结论：⑴线性相关性、回收率、准确率和精确度等方法学考察指标均符合科研要求，表明反相高效液相色谱法对临床样本的检测具有可靠性和可行性；⑵尿中核苷有望成为一种新型标记物，与其它肿瘤标记物和检查手段结合对原发性胆囊癌的初筛和早期诊断提供重要的临床参考价值。