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我国近代农业快速发展,小麦已成为我国种植量第二的粮食作物,每年的总产量基本保持在10亿吨左右。但是目前我国耕地面积大量减少且耕地的盐渍化越来越严重,同时因气候变化产生的高温、干旱而影响了小麦的高产稳产,所以如何提高小麦的抗逆、抗冻和抗病虫害能力是研究的热点。
通过转基因方法可以将来自不同生物的相关抗逆、抗病虫基因导入小麦,从而提高小麦的抗逆性和抗病虫性。小麦转基因常用的三种方法是:基因枪法、农杆菌介导法和花粉管通道法。因为基因枪法有无宿主限制、受体范围广、植株再生率高、操作简单等特点,所以目前小麦转基因大多采用基因枪法来进行转化。
现在有很多研究都致力于寻找优秀的目的基因转入小麦,来提高小麦的抗逆性、抗病虫性和品质。本研究的目的基因有三种:OsNACl、GAFP、ThpI基因。OsNACl是从水稻中克隆出一个抗旱耐盐的转录因子基因,可以提高植物的抗盐耐旱性;GAFP基因编码的天麻抗真菌蛋白GAFP是从天麻球茎外层组织中分离纯化的一种能强烈抑制真菌生长的蛋白,能够提高小麦的抗病性;ThpI基因编码一种云杉卷叶蛾抗冻蛋白,可以提高小麦的抗冻性。本研究以宁麦13为受体,利用基因枪法将OsNACl、GAFP和ThpI基因转入小麦中。主要结果如下:
1、OsNACl、GAFP和ThpI基因转化宁麦13
(1)利用基因枪法将OsNACl、GAFP和ThpI基因转入小麦,均获得再生植株;再生频率分别为7.9%、7.3%和10.5%。
(2)对T(0)代再生植株进行PCR检测。转OsNACl获得了14株阳性苗,GAFP获得了1株阳性苗,ThpI获得4株阳性苗。转化率分别为:0.82%、0.21%、0.85%。
2、对转化OsNACl的T1代的检测和抗逆性鉴定
(1)对T1代植株进行PCR检测,出现7条阳性条带,说明目的基因转入。通过实时荧光定量PCR检测进一步证明目的基因在T1代转基因植株中的表达量增加;
(2)对转基因T1代幼苗和对照用250mmol/L的NaCl处理,结果显示转基因植株的Pro、SOD和POD等生理指标都比宁麦13有显著提高。