【摘 要】
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目的:构建盲肠结扎穿刺法（cecumligationandpuncture,CLP）脓毒症模型,探讨阿米替林（amitriptyline,AMT）对脓毒症幸存小鼠中枢炎症的抑制反应及其机制研究。方法:30只C57BL/6小鼠随机分2组:SHAM组和CLP组,蛋白免疫印迹法检测海马和杏仁核组织 Nod 样受体蛋白 3（NOD-like receptor pyrin domain containing
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目的:构建盲肠结扎穿刺法（cecumligationandpuncture,CLP）脓毒症模型,探讨阿米替林（amitriptyline,AMT）对脓毒症幸存小鼠中枢炎症的抑制反应及其机制研究。方法:30只C57BL/6小鼠随机分2组:SHAM组和CLP组,蛋白免疫印迹法检测海马和杏仁核组织 Nod 样受体蛋白 3（NOD-like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3）、剪切的半胱天冬酶-1（cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 1,c-caspase-1）蛋白表达变化,旷场实验和新物体识别检测小鼠神经行为学变化。细胞实验中,AMT预处理脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）体外刺激的BV2细胞,流式细胞技术检测细胞活化量,蛋白免疫印迹法检测NLRP3、c-caspase-1蛋白表达及CCK8法检测细胞毒性。另有80只C57BL/6小鼠随机分4组:SHAM组、SHAM+AMT组、CLP组、CLP+AMT组,记录术后14d内小鼠体温、体重和存活率,蛋白质免疫印迹法检测术后28 d海马及杏仁核NLRP3、c-caspase-1蛋白表达及ELISA法检测白介素-1β（interleukin 1β,IL-1β）水平,尼氏染色检测小鼠海马和杏仁核神经元损伤情况,旷场新物体识别等检测小鼠神经行为学变化。结果:1.与SHAM组相比,CLP组小鼠海马及杏仁核组织术后3d、7d、14d、28 d均高表达NLRP3、c-caspase-1蛋白。旷场中,与SHAM组相比,CLP组小鼠术后14 d总移动距离较低,CLP组小鼠术后28 d总移动距离无差别且中央区停留时间减少,跨格次数降低;新物体识别中,与SHAM组相比,CLP组小鼠术后28 d识别指数降低,证明CLP组小鼠在术后28 d存在认知功能障碍和抑郁样行为。2.BV2细胞实验证明,与LPS组相比,LPS+AMT组BV2细胞活化量降低,AMT可缓解LPS致BV2细胞活化。与LPS+ATP组相比,LPS+ATP+AMT组低表达NLRP3、c-caspase-1蛋白且活细胞数量增加,AMT可缓解BV2细胞焦亡反应。3.与CLP组相比,CLP+AMT组小鼠生存率提高、脓毒症临床评分降低。与CLP组相比,CLP+AMT组小鼠术后28 d海马和杏仁核内NLRP3、c-caspase-1、IL-1β表达量降低;尼氏染色中,与CLP组相比,CLP+AMT组小鼠海马和杏仁核组织染色深染,AMT可缓解脓毒症小鼠中枢损伤。与CLP组相比,CLP+AMT组小鼠术后28d中央区停留时间、跨格次数和识别系数增加,强迫游泳和悬尾不动时间降低,AMT缓解小鼠术后认知功能障碍和抑郁样行为。结论:AMT通过抑制小胶质细胞NLRP3-c-caspase-1-IL-1β信号通路,缓解脓毒症幸存小鼠海马和杏仁核炎症反应,缓解脓毒症幸存小鼠认知功能障碍和抑郁样行为。
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目的:眼外伤、内眼手术等原因能够引起角膜内皮失代偿,目前唯一的治疗方式是通过角膜移植恢复视力。本研究目的是探究N-（2）-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺（丙谷二肽）在小鼠角膜内皮损伤过程中能否发挥保护作用及机制,为预防角膜内皮失代偿提供新的途径。方法:通过小鼠急性高眼压前房灌注模型造成角膜内皮损伤,对照组使用乳酸钠林格氏溶液在小鼠前房持续高眼压灌注1小时,眼压为44±3.5mmHg,实验组在林格氏溶液中
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