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目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)是肿瘤坏死因子家族的成员，它可以选择性诱导肿瘤细胞凋亡而对正常组织细胞无明显的毒副作用，但一些肿瘤对TRAIL并不敏感，因而研究重点倾向于TRAIL与放化疗联合应用。最近研究发现，TRAIL能增强低剂量阿霉素(ADM)高效诱导人骨肉瘤细胞凋亡。蛋白激酶C-δ(protein kinase C-δ，PKC-δ)是PKC亚型中的成员，它在细胞周期调节和许多类型细胞的凋亡方面发挥重要作用。PKC-δ在DNA损伤因子、肿瘤坏死因子、抗Fas抗体等诱导的凋亡起始时被激活。本实验以体外培养的人骨肉瘤细胞株MG-63为模型，初步观察TRAIL与低剂量ADM联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞凋亡的影响，探讨PKC-δ在TRAIL与ADM联合诱导MG-63凋亡中的作用，并用PKC激活剂佛波脂(PMA)和PKC-δ特异性抑制剂Rottlerin对这一凋亡过程的影响来证实PKC-δ在其中的作用，以期为骨肉瘤的治疗提供新的策略。
方法：将MG-63细胞用含10％小牛血清的DMEM(含非必需氨基酸)培养基置于37℃、5%CO2孵箱内常规培养。取对数生长期的细胞，利用倒置相差显微镜观察单用TRAIL组、对照组、单用ADM组、TRAIL+ADM联合应用组的MG-63细胞形态。逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测PKC-δ的mRNA在TRAIL组、空白对照组、ADM组、TRAIL+ADM组中的表达情况。用流式细胞仪(FCM)检测Rottlerin+TRAIL+ADM组与TRAIL+ADM组MG-63细胞的凋亡率，PMA+TRAIL+ADM组与TRAIL+ADM组MG-63细胞的凋亡率。统计学处理：实验数据以均数±标准差表示，使用SPSS13.0软件包进行t检验，P＜0.01认为有统计学意义。
结果：倒置相差显微镜观察，与单用TRAIL组、单用ADM组和空白对照组相比，5μg/ml的ADM与500ng/ml的TRAIL联合作用24h后，部分MG-63细胞变圆、悬浮、空泡化现象明显，胞质浓缩，胞质内细胞液不清亮，可见大小不等的细胞碎片。RT-PCR结果显示：与单用TRAIL组、单用ADM组和空白对照组相比，TRAIL和ADM联合应用组PKC-δ的mRNA的表达明显增加，且差异有显著性(P＜0.01)。FCM检测结果表明：TRAIL+ADM组作用12h后MG-63细胞的凋亡率为11.88%±0.30%，Rottlerin与TRAIL+ADM联合用药作用12h后MG-63细胞的凋亡率仅为3.33%±0.31%，而PMA与TRAIL+ADM联合用药作用12h后MG-63细胞的凋亡率达到18.85%±0.41%。Rottlerin能降低TRAIL与ADM联合诱导MG-63细胞的凋亡率，PMA则能增加其凋亡率，且差异有显著性(P＜0.01)。
结论：TRAIL与低剂量ADM联合作用可以促进体外培养的骨肉瘤细胞株MG-63凋亡。Rottlerin能抑制TRAIL与低剂量ADM联合诱导MG-63细胞的凋亡，PMA能增强TRAIL与低剂量ADM联合诱导MG-63细胞的凋亡。PKC-δ可能参与了TRAIL与低剂量ADM联合诱导MG-63细胞凋亡的过程并起促进作用。