第一部分：动物实验　　实验一：忠伦阿汤治疗CIA大鼠的疗效观察　　目的：观察及评价忠伦阿汤对CIA大鼠的疗效。　　方法：SD大鼠于第1天和第7天注射II型胶原蛋白进行造模，取造模成功的大鼠随机分为模型组（model）、甲氨蝶呤组（MTX）、忠伦阿汤高剂量组（zhongl hd）、忠伦阿汤中剂量组（zhongl md）、忠伦阿汤低剂量组（zhongl ld）、苦参碱组（matrine）.于第一次免疫第11天开始灌胃给药，正常组生理盐水灌胃，连续给药6周。每周测量大鼠体重、后脚掌的厚度并进行关节炎指数评分。　　结果：模型组大鼠后脚掌的厚度、肿胀度、关节炎指数显著增高(P＜0.05)，苦参碱、忠伦阿汤剂量依赖性的显著降低大鼠后脚掌厚度和关节炎指数，忠伦阿汤高剂量组优于MTX组(P＜0.05)。　　结论:忠伦阿汤可显著缓解RA大鼠关节炎症。　　实验二：忠伦阿汤对CIA大鼠Th1、Th2细胞分化的调控作用　　目的:观察忠伦阿汤对CIA大鼠Th1和Th2细胞分化的调控作用　　方法:SD大鼠分组给药同实验一。灌胃6周后取材：　　1.流式细胞术检测外周血Th1、Th2细胞；　　2.RT-PCR检测IFN-γ和IL-4 mRNA的表达；　　3.ELISA检测血清IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-4和 IL-10蛋白的表达。　　结果：模型组与正常组比较，Th1细胞百分比以及其分泌的细胞因子IFN-γ mRNA和蛋白、IFN-r、TNF-α、IL-1β蛋白水平和Th1/Th2比值明显升高，Th2细胞百分比及其分泌的细胞因子IL-4 mRNA和蛋白、IL-4和IL-10蛋白水平明显下调（P＜0.05）；与模型组相比，苦参碱和忠伦阿汤剂量依赖性的抑制这一过程（P＜0.05），以忠伦阿汤高剂量组作用最显著，对Th1、Th2细胞分化和IL-4的表达的调节优于MTX组（P＜0.05）。　　结论：忠伦阿汤能调节Th1和Th2细胞的平衡以及相关细胞因子的表达，抑制RA关节炎症。　　实验三：忠伦阿汤对CIA大鼠Treg和Th17细胞的调控作用　　目的：观察忠伦阿汤对CIA大鼠Treg和Th17细胞分化的调控作用　　方法：SD大鼠分组给药同实验一。灌胃6周后取材：　　1.流式细胞术检测外周血Treg细胞、Th17细胞的百分比；　　2.RT-PCR检测Foxp-3、TGF-β、IL-6和IL-17 mRNA表达；　　3.ELISA检测血清TGF-β、IL-6和IL-17蛋白水平。　　结果:与正常组比较，模型组 Th17细胞百分比以及其分泌的细胞因子IL-6和IL-17 mRNA和蛋白水平明显升高，Treg细胞百分比及其分泌的细胞因子 TGF-β mRNA和蛋白水平明显下调（P＜0.05）；与模型组相比，苦参碱和忠伦阿汤剂量依赖性的调节异常Treg细胞、Th17细胞的分化（P＜0.05），以忠伦阿汤高剂量组作用最显著，对TGF-β、IL-4mRNA表达的调节优于MTX组，对Treg细胞分化、IL-17mRNA表达的调节弱于MTX组（P＜0.05）。　　结论：忠伦阿汤通过调节CIA大鼠Treg细胞和Th17细胞的平衡以及相关细胞因子的表达，从而抑制RA关节炎症。　　实验四：忠伦阿汤对CIA大鼠NF-kappaB信号通路的调控作用　　目的：观察忠伦阿汤干预CIA大鼠后NF-kappaB信号通路相关因子的表达，研究忠伦阿汤调节RA的免疫机制。　　方法：SD大鼠分组给药同实验一。灌胃6周后分离外周血T细胞，通过Western-blot法检测细胞p65、p-Iκ Bα、Iκ Bα蛋白的表达。　　结果：模型组 p65、p-IkBα蛋白的表达较正常组明显升高（P＜0.05）。苦参碱和忠伦阿汤剂量依赖性的下调模型组p65、p-IkBα表达，但弱于 MTX组（P＜0.05）。各组间 IkBα表达未见明显差异（P＞0.05）。提示忠伦阿汤可能抑制T细胞NF-kappaB通路的活化以调节T细胞亚群的分化，从而治疗RA。　　结论：忠伦阿汤通过抑制 NF-kappaB信号通路活化以调节 RA T细胞亚群的分化。　　第二部分：细胞实验　　实验五：忠伦阿汤对体外培养T细胞分泌的细胞因子表达的影响　　目的：观察忠伦阿汤对T细胞因子表达的影响　　方法：小鼠T细胞中加入佛波醇酯（PMA）和离子霉素(Ion)　　以不同终浓度的忠伦阿汤含药血清与T细胞共同培养,MTT法选择最佳浓度,纳入后续实验，　　实验分组：　　正常组：　　模型组：T淋巴细胞+PMA+Ion　　CH828组：T淋巴细胞+PMA+Ion+1μ M CHS828　　MTX组：T淋巴细胞+PMA+Ion+MTX　　苦参碱组：T淋巴细胞+PMA+Ion+苦参碱　　忠伦阿汤组： T淋巴细胞+PMA+Ion+25%忠伦阿汤含药血清　　忠伦阿汤+CHS828组:T淋巴细胞+PMA+Ion+25%忠伦阿汤含药血清+1μ M CHS828　　苦参碱+CHS828组：.T淋巴细胞+PMA+Ion+25%苦参碱+1μ M CHS828　　培养72小时，收集细胞。　　RT-PCR法检测忠伦阿汤含药血清干预T细胞后，T细胞因子IFN-γ、IL-4、 Foxp-3、TGF-β、IL-6、RORyt和 IL-17mRNA的表达；　　1.ELISA法检测忠伦阿汤含药血清干预 T细胞后，T细胞因子IL-6、TGF-β、IFN-γ、TNF-a、IL-1β、IL-4、 IL-10和IL-17蛋白表达　　结果:1、MTT法测定T细胞增殖，PMA的浓度为10ng/mL,lon浓度为1μ M促增殖作用最强，25%浓度忠伦阿汤24h抑制T细胞增殖作用达到0.501523%，可用于后续实验（P＜0.05）。　　2、RT-PCR法检测显示，模型组 Foxp-3、IL-4、TGF-β mRNA水平显著降低，IFN-γ、IL-6、RORyt和 IL-17mRNA水平显著升高，提示模型组T细胞分化失衡（P＜0.05），与模型组相比，可被忠伦阿汤含药血清组和苦参碱明显抑制（P＜0.05）。忠伦阿汤调节Foxp-3、IL-6表达的能力优于MTX（P＜0.05），其他细胞因子调节和MTX无明显差异（P＞0.05）。苦参碱对细胞因子的影响弱于MTX（P＜0.05），提示中药单体的作用弱于复方制剂。当加入NF-kappaB信号通路特异抑制剂CHS828，模型组细胞因子的变化被抑制剂显著抑制（P＜0.05）。当追加苦参碱或忠伦阿汤后，药物+抑制剂组的调节作用明显优于单独抑制剂组（P＜0.05）。　　3、ELISA法检测所示，模型组和正常组比较IL-4、TGF-β和IL-10蛋白水平显著降低，TNF-a、IL-1β、IFN-γ、IL-6和 IL-17蛋白水平显著升高（P＜0.05）。当忠伦阿汤含药血清组和苦参碱干预后，与模型组相比，此作用被明显抑制（P＜0.05），同时被NF-kappaB信号通路特异抑制剂CHS828明显抑制（P＜0.05）。当追加苦参碱或忠伦阿汤含药血清后，药物+抑制剂组的调节作用明显优于单独抑制剂组（P＜0.05），提示苦参碱和忠伦阿汤含药血清调节 RA T细胞分化不仅限于NF-kappaB信号通路。　　结论：忠伦阿汤具有免疫调节作用,可恢复T细胞因子的平衡，从而治疗RA。　　实验六：忠伦阿汤对体外培养的T细胞NF-kappaB信号通路的影响　　目的：观察忠伦阿汤对体外培养的T细胞NF-kappaB信号通路活化的影响。　　方法：T细胞分离，分组同实验5，培养72小时，收集细胞，采用Western blot方法检测T细胞p65、p-IκBα和IκBα蛋白的表达。　　结果：模型组较正常组比较，刺激T细胞后，p65、p-IkBα蛋白表达明显升高（P＜0.05），IkBα含量无明显变化（P＞0.05）。当加入NF-kappaB通路抑制剂CHS828时，通路明显被抑制（P＞0.05）。忠伦阿汤含药血清组和苦参碱能显著下调模型组 T细胞 p65、p-IkBα蛋白水平，抑制 NF-kappaB活化（P＜0.05）。各组间 IkBα表达未见明显差异（P＞0.05）。提示忠伦阿汤可能通过抑制T细胞NF-kB通路的活化调节T细胞亚群的分化。　　结论：忠伦阿汤可能通过抑制NF-kappaB信号通路，调节T细胞亚群的分化,从而治疗RA。