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局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)是一组病因和发病机制各异的临床病理综合征,病理特征为部分肾小球发生节段性硬化和足突融合,临床主要表现为肾病综合征,且治疗困难,预后较差,是导致终末期肾疾病的主要原因之一。国内南京军区总医院肾脏病研究所研究也证实FSGS发病率在不断上升。目前认为原发性FSGS发病机制可能与足细胞损伤,T细胞免疫功能异常,循环通透因子,以及细胞因子介导的免疫损伤有关。microRNAs(miRNAs)是近来发现的在转录后水平调控基因表达的一组内源性的非编码小RNA,在细胞生长和发育过程中起多种作用。条件性敲除小鼠足细胞中的Dicer和drosha酶发现小鼠蛋白尿、足突消失、系膜细胞增殖和肾小球硬化,揭示了miRNA在肾小球疾病进展中的重要调控作用。循环microRNA是细胞外microRNA在人体体液中的特殊存在方式,可介导细胞间的相互通信以及作为判断生理病理状态的新型生物标志物。miRNA在肾脏疾病方面的研究包括肾脏肿瘤,狼疮性肾炎,糖尿病肾病,急性肾损伤,肾移植排斥等。本研究通过对FSGS患者组织及尿液miRNA谱进行检测,和对miRNA在足细胞中功能的机制研究,进一步认识miRNAs在FSGS发病机制中的作用。研究一尿液miRNAs作为局灶节段性肾小球硬化的疾病活动性生物标志物的研究摘要目的:研究局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者尿液中microRNAs的表达变化以及miRNAs的变化与FSGS患者疾病活动性和激素治疗效应之间的关系。方法:microarray检测尿液miRNAs的表达谱,定量PCR检测98例活动性FSGS患者,94例非活动性FSGS患者和94例正常对照单个尿液中的miRNAs水平,分析尿液中miRNAs的表达变化与尿蛋白、白蛋白等临床指标之间的关系。并检测55例膜性肾病及50例糖尿病肾病患者尿液候选miRNAs的水平,与FSGS患者进行对比。41例活动性FSGS患者治疗前后尿液中miRNAs的变化进行最终验证。结果:尿液miR-196a,miR-30a,miR-155和miR-490在活动性FSGS组的表达水平不仅显著高于正常对照组而且高于非活动性FSGS组(P<0.001)。尿液miR-196a,miR-155,miR-30a和miR-490的变化倍数与FSGS患者的尿蛋白、血白蛋白、血清总胆固醇存在显著相关性(P<0.05),尿液miR-196a和miR-490水平与患者eGFR显著相关(P<0.05)。在MN和DN中,尿液miR-155在疾病活动组显著高于非活动组和正常组(P<0.001),而尿液miR-196a,miR-30a,miR-490在活动组和非活动组均显著高于正常对照组(P<0.001),与FSGS疾病中变化不同。激素有效患者的尿液中,miR-196a,miR-490,miR-30a表达水平随着病情的缓解也明显下降(P<0.05)。激素无效患者的尿液中,病情没有缓解而miRNAs表达水平也没有显著地改变(P>0.05)。结论:FSGS患者疾病活动状态下尿液miR-196a,miR-30a和miR-490表达水平与疾病的活动性密切相关,且在FSGS疾病中有别于MN和DN,提示miR-196a,miR-30a和miR-490能作为判断FSGS疾病活动性的新型的无创性生物标志物。研究二局灶节段性肾小球硬化患者组织miRNAs的表达变化及其意义摘要目的:研究局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者肾组织microRNAs的表达变化以及miRNAs的变化与FSGS患者疾病活动性之间的关系。方法:选择FSGS患者18例,肾癌患者6例,通过Taqman microRNAarray和定量PCR检测18例患者肾组织中miRNAs的表达水平。分析肾组织miRNAs的表达变化与尿蛋白、白蛋白等临床指标之间的关系。结果:芯片显示FSGS中升高的miRNAs为170个,下降的miRNAs为9个;定量PCR显示与癌旁肾组织比较,FSGS患者肾组织中 miR-155,miR-194,miR-30a,miR-146a,miR-196a,miR-21,miR-27b 和 miR-29c 升高倍数均大于 2 倍(P<0.05)。miR-194,miR-155,miR-146a,miR-196a和miR-21的变化倍数与患者尿蛋白具有显著相关性;miR-155,miR-30a和miR-196a与血白蛋白之间存在相关性(P<0.05)。结论:FSGS患者疾病活动状态下组织中一组 miRNAs:miR-155,miR-194,miR-30a,miR-146a,miR-196a,miR-21,miR-27b 和 miR-29c 表达水平上调,且 miR-155,miR-196a,miR-30a表达水平与尿蛋白、白蛋白等临床指标显著相关,miR-196a,miR-155,miR-30a可能在FSGS疾病发病过程中起着重要的作用。