Alzheimer's Disease相关基因NCT启动子分离及其转录调控机制的研究

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  本文从基因转录起始位点的确认、启动子的分离与克隆以及顺式元件的鉴定等方面开展了对NCT基因转录调控机制的初步研究。首先设计引物通过5’RACE和引物延伸实验确定转录起始位点以及扩增12个互相套叠的缺失片段,构建Luc报告基因载体,通过在原代神经细胞和Hela细胞中进行缺失体的瞬时转染及活性分析,确定启动子所在区域。在顺式元件的鉴定研究内容中,采用MatInspector对NCT基础启动子中可能存在的顺式元件进行生物信息学分析。   研究发现:NCT的基础启动子位于-359/-90之间,富含GC,位于CpG岛内。此270bp片段足以在神经性及非神经性细胞中启动报告基因的表达;而-432/-4间的约420bp片段具有显著增强的启动活性,很可能在-432/-359区间内具有某种增强性调控元件。420bp启动子中缺乏TATA-box、CAAT-box以及Initiator等典型核心元件,但含有四个AP1和两个NFAT的作用位点,在体外试验中都可以结合相应的转录因子。通过定点突变和PDTC诱导进一步确证:AP1-3和APl-4位点能够诱导性的调节NCT启动子的启动活性;NFAT与AP1共同作用诱导性调节NCT启动子的启动活性。
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