乙肝表面抗原(Hepatitis B Surface Antigen，HBsAg)不仅是HBV包膜的主要组成成分，而且能诱导机体产生保护性免疫应答。因此，HBsAg不仅是临床上判断HBV急性或慢性感染的重要标志，也是HBV疫苗的重要组分之一，对于HBV的防治有着重要的指导意义。然而，在自然情况下，由于病毒本身的特性，以及内外的选择压力，导致s基因有较高的变异，为预防和控制HBV的传播带来了巨大的困难。因此，对HBV s基因变异的研究是现今生物学及医学领域的热点问题，受到人们的关注。HBsAg的G145R和K122I突变是临床上很经典的两种免疫逃逸突变，据报道这两种突变均会显著改变HBsAg的抗原性，也会阻碍机体诱导针对野生型HBsAg的特异性抗体应答的产生。另外，临床上也发现了G145A，G145K以及K122L取代，但这些突变的出现频率远低于G145R和K122I突变，提示除了氨基酸突变位点外，氨基酸的理化特性可能也是决定突变发生免疫逃逸的重要机制。为此，我们系统研究了G145R和K122I等突变株产生的原因及影响。　　 第一章先简要概述了HBV的结构组分及感染复制周期；其次阐述HBsAg的结构及临床上出现的变异和产生的效应；最后结合临床病例及生化特性提出了本论文的研究目的及意义。前期研究已经根据氨基酸侧链的化学特性(疏水性、极性等)构建了不同类型的氨基酸突变(包括K122G、K122M、K122L、K122P、K122N、K122Q、K122T、K122D、K122E、K122W、K122H、G145R、G145M、G145L、G145I、G145P、G145N、G145Q、G145T、G145D、G145E、G145W、G145H突变的HBsAg超表达载体)并初步检测了突变抗原在细胞中的表达和分泌情况。　　 第二章将质粒转染Huh7细胞，利用ELISA检测了它们与不同anti-HBs单抗的结合能力(抗原性)。结果表明，122位赖氨酸(K)除了突变为异亮氨酸(Ⅰ)会对HBsAg的表达和抗原性有很大的影响外，突变为其它氨基酸后无明显变化；而145位甘氨酸(G)突变为精氨酸(R)和色氨酸(W)之后，会严重削弱HBsAg的分泌，G145I、G145P和G145W还对HBsAg的抗原性有很大的影响。这些结果提示除了氨基酸位点之外，氨基酸侧链基团本身的理化特性也对HBsAg的抗原性产生明显影响。　　 第三章是为了进一步探讨第122位和145位氨基酸突变后HBsAg的免疫学特性是否发生改变，采用质粒电击免疫，研究了各突变对HBsAg诱导免疫应答的影响，发现在第145位氨基酸的取代中，G145I、G145E、G145W和G145R所诱导的抗体应答明显降低；在第122位氨基酸的取代中，与K122I明显削弱诱导的抗体应答不同，K122L所诱导的抗体应答仅有轻度的降低。进一步利用尾静脉高压水注射方法，将HBV复制性质粒pAAV-HBV1.3导入小鼠肝脏，模拟HBV体内感染，然后用ELISA、ELISPOT等检测手段去检测各突变HBsAg的免疫原性。结果表明突变HBsAg诱导的预存免疫应答清除野生型HBsAg的速度变慢，提示发生了免疫逃逸。　　 第四章总结了本论文得到的相关结果。研究结果表明，虽然HBsAg第122位的赖氨酸及145位的甘氨酸突变为其它的氨基酸后，HBsAg的表达、分泌及和各种anti-HBs单抗的反应能力除了个别突变外没有很大的差异，但145位突变为其它类型的氨基酸及122位突变为异亮氨酸后HBsAg诱导机体产生特异性抗体应答的能力发生了显著性的改变，较野生型HBsAg来说，都显著性降低，而122位突变为亮氨酸后影响不大。综合本章和前一章结果，说明临床上122位赖氨酸更易于变异为异亮氨酸，而145位的甘氨酸虽然突变为其他类型的氨基酸也会对HBsAg的抗原性及免疫原性有一定的影响，但可能是因为突变为精氨酸只发生了一个碱基的替换，所以这种突变更容易发生。本研究证实了sG145R和sK122I等经典取代存在的意义，为研究HBV变异谱提供了参考。