论文部分内容阅读
目的: 以青藤碱(sinomenine,SN)为原料,合成新的衍生物——青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯(4-palmitoyl-sinomenine),对比观察两者对LPS诱发的炎症反应的治疗效果,并对其抗炎机制进行初步研究。 方法: 1.青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的合成:将青藤碱进行酯化修饰生成青藤碱衍生物——青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯,并进行质谱分析。 2.青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯抗炎作用的分析:将不同浓度的青藤碱和青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯腹腔注射给小鼠做预防性治疗,1h后LPS腹腔注射诱发内毒素血症,观察各组小鼠生命体征和生存状况。取各组小鼠外周血,收集血清,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELI SA)法检测各组小鼠血清中炎症因子TNF-a、IL-1β、IL-6的表达水平。 3.青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯毒性分析:以RAW264.7细胞和小鼠原代腹腔巨噬细胞为研究对象,应用MTT法检测青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯对细胞增殖的影响。 4.青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外对RAW264.7细胞的抗炎作用:通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测 RAW264.7细胞炎症因子TNF-a、IL-1β、IL-6mRNA的相对表达量。 5.青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯对NF-κB表达水平的影响:不同浓度的青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯处理RAW264.7细胞24h后,LPS刺激6h,收集标本,采用蛋白印记(western blot)的方法检测细胞中NF-κB的表达量。 结果: 1.成功制备青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯。 2.一定浓度的青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯对小鼠进行预处理,对内毒素血症的治疗作用明显好于相同浓度青藤碱。ELISA结果显示青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯可以明显减少小鼠血清当中炎症因子TNF-a、IL-β、IL-6的含量。 3.MTT结果显示青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯在10μM以下对于RAW264.7细胞的增殖没有明显的抑制作用,而原代腹腔巨噬细胞可以耐受20μM的浓度。 4.qRT-PCR结果证明青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯可以明显抑制RAW264.7细胞炎症因子TNF-a、IL-1β、IL-6mRNA的表达量。且与未处理组相比有统计学差异(P<0.05)。 5.Western blot发现,青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯处理过的RAW264.7细胞NF-κB的表达量减少,且表现出浓度依赖性,即随着青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯浓度的增加,细胞内NF-κB的表达量减少。 结论: 1.青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯与修饰之前的青藤碱榴比,对于LPS诱导的炎症反应干预效果增强。 2.青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的抗炎效果可能是通过抑制NF-κB信号通路的激活实现的。