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目的:观察瘦素对肝细胞损伤与脂肪含量的影响，及扶正化瘀方药物血清的可能干预作用。探讨瘦素对肝星状细胞(HSC-T6)活化功能、瘦素受体及其细胞内信号分子的影响，观察扶正化瘀方与虫草提取物对瘦素细胞内信号转导的作用，探讨该中药抗肝星状细胞活化及其肝纤维化的作用机制。
方法:1.分离培养原代肝细胞，以含(10-300)μg/L瘦素及0.5％-40％小牛血清的培养液温育细胞18h。以50μg/L瘦素刺激肝细胞进行药效实验，并分为正常组、瘦素刺激组、正常大鼠血清组与扶正化瘀方药物血清组，后2组除添加50μg/L瘦素外，还同时给予10％浓度的不同血清，温育18h。
2.传代培养HSC-T6细胞株，以(10-300)μg/L瘦素温育细胞18h左右。选择效应较为明显的150μg/L瘦素刺激细胞，分别同时给予(20-500)mg/L扶正化瘀方与(50-200)mg/L虫草提取物，温育18h。
3.试剂盒测定肝细胞培养上清ALT、LDH活性，肝细胞内LDH活性、三酰甘油(TG)含量。
4.MTT法测定HSC-T6的细胞增殖。
5.Western印迹法，分析HSC-T6细胞中瘦素长型受体(Ob-Rb)与细胞外信号调节激酶(ERK)的蛋白表达，α-SMA与Ⅰ型胶原蛋白表达；采用磷酸化抗体、Western印迹分析细胞Ob-Rb与ERK1/2磷酸化水平；提取细胞核蛋白、Western印迹分析ELK1蛋白磷酸化水平。
结果:1.10-300μg/L瘦素对培养肝细胞上清ALT、LDH及肝细胞内LDH活性无影响。
2.随培养液中小牛血清浓度增加，培养肝细胞内TG含量增加。瘦素对低血清(0.5％)培养的肝细胞内TG含量无明显影响；100-200μg/L瘦素降低10％-40％血清培养肝细胞内TG含量。
3.不同剂量瘦素对HSC-T6的细胞增殖无明显影响。(50-300)μg/L瘦素明显促进HSC-T6细胞的α-SMA与Ⅰ型胶原蛋白表达，并呈一定的剂量依赖性。
4.不同剂量瘦素促进HSC-T6中瘦素受体蛋白(Tyr985)磷酸化水平、促进ERK1/2磷酸化、及核内转录因子ELK1磷酸化水平，呈一定的剂量依赖性。
5.扶正化瘀方抑制瘦素刺激的HSC-T6细胞表达α-SMA与Ⅰ型胶原蛋白；虫草提取物抑制瘦素刺激的HSC-T6细胞表达Ⅰ型胶原；两药物均不同程度抑制ERK1/2磷酸化水平。
结论:1.瘦素对培养肝细胞无明显细胞毒性与炎症损伤作用，对血清刺激的肝细胞脂肪含量有一定抑制作用。
2.扶正化瘀方药物血清对培养肝细胞脂肪含量无明显影响。
3.瘦素促进HSC-T6活化，其主要机制在于上调JAK/ERK信号转导，即瘦素受体的活性、胞内信号分子ERK磷酸化水平、核内转录因子ELK1活性。
4.扶正化瘀方可抑制瘦素刺激HSC-T6的α-SMA与胶原表达；虫草提取物抑制瘦素刺激HSC-T6的胶原表达。其机制与抑制ERK磷酸化，即与干预瘦素的JAK/ERK细胞内信号转导有关。